山羊化脓隐秘杆菌重庆分离株CbpA肝素结合结构域鉴定 |
| |
引用本文: | 沈克飞,许国洋,胡瑞思,徐登峰,杨睿,付利芝,张素辉.山羊化脓隐秘杆菌重庆分离株CbpA肝素结合结构域鉴定[J].畜牧兽医学报,2018(1). |
| |
作者姓名: | 沈克飞 许国洋 胡瑞思 徐登峰 杨睿 付利芝 张素辉 |
| |
作者单位: | 重庆市畜牧科学院;西北农林科技大学动物医学院; |
| |
摘 要: | 本研究旨在对山羊化脓隐秘杆菌重庆分离株的胶原结合蛋白(collagen-binding protein,Cbp)CbpA(CbpACQ)进行序列分析,鉴定其中2个潜在的肝素结合结构域NRB和B1。运用生物信息学软件分析CbpA-CQ基因及其编码产物。采用PCR扩增NRB和B1基因,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1。融合蛋白GST-NRB和GST-B1在大肠杆菌DE3菌株中被诱导表达,使用Gluthathione-Sepharose 4B纯化。采用免疫印迹检测融合蛋白GST-NRB、GST-B1与HeLa细胞的黏附情况,以及肝素对融合蛋白黏附细胞的抑制情况。结果显示,重庆株CbpA有7个胶原结合蛋白B结构域,约占全长的55%,此结构域与化脓隐秘杆菌、链球菌属等细菌有同源性。重庆株CbpA与化脓隐秘杆菌的CbpA在进化树中聚集成一个进化支。从诱导菌裂解物上清中亲和纯化得到融合蛋白GST-NRB和GST-B1。GST-NRB、GST-B1呈剂量依赖性黏附HeLa细胞,肝素呈剂量依赖性抑制GST-NRB、GST-B1黏附HeLa细胞。结果表明尽管CbpA-CQ有很大变异性,但具有已知化脓隐秘杆菌CbpA的共同序列特征;其NRB和B1区域为肝素结合结构域。
|
本文献已被 CNKI 等数据库收录! |
|