水通道蛋白8原核表达载体的构建及其表达纯化 |
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引用本文: | 张淑芝,夏海武,高明刚.水通道蛋白8原核表达载体的构建及其表达纯化[J].畜牧与兽医,2018(11). |
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作者姓名: | 张淑芝 夏海武 高明刚 |
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作者单位: | 潍坊学院生物与农业工程学院/山东省高校生物化学与分子生物学重点实验室 |
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摘 要: | 为研究水通道蛋白8 (aquaporin 8,AQP8)的结构和功能,构建AQP8原核表达载体,表达纯化GST-AQP8融合蛋白。PCR扩增小鼠AQP8羧基端270bp的特异序列,定向连接到pGEX-4T-1载体,构建原核表达载体pGEX-4T-1/AQP8,转化大肠杆菌表达菌株BL21,IPTG诱导表达GST-AQP8融合蛋白,并对融合蛋白进行亲和层析纯化。酶切鉴定和DNA测序结果表明p GEX-4T-1/AQP8表达载体构建成功; SDS-PAGE结果证实GST-AQP8融合蛋白有效表达且成功纯化。本研究成功制备高纯度的GST-AQP8融合蛋白,为进一步探究AQP8的结构和功能提供基础。
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