| 口疮病毒O2O基因的克隆、表达及多抗制备 |
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| 作者姓名： | 王勇 赵玉洁 杨侃侃 殷冬冬 白彩霞 潘飞 梅跃辉 颜秀梅 王君 徐前明 蒋书东 |
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| 作者单位： | 1. 安徽农业大学动物科技学院,合肥,230036;2. 安徽华澳生物技术有限公司,合肥,231131 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金,安徽省自然科学基金,安徽农业大学稳定和引进人才科研项目,安徽农业大学大学生科技创新基金项目共同资助 |
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| 摘 要： | 羊口疮是由口疮病毒(orf virus,ORFV)引起的接触性、嗜上皮性的传染病.O2O基因是该病毒重要的酶活力调节蛋白.根据GenBank中O2O基因的序列设计引物,从ORFV-F10株感染的病料中提取DNA,PCR扩增获得目的基因.然后将其亚克隆至pET-32a(+)原核表达载体,构建重组表达质粒pET-32a-ORF-020.鉴定正确后转化BL21感受态细胞,进行IPTG诱导表达.表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析.最后将纯化的020蛋白免疫BALB/c雌鼠,制备多抗血清.SDS-PAGE结果表明,ORFV O2O基因在体外获得正确表达,大小约37 kDa.Western-blot结果表明,制备的多抗血清能够与O2O蛋白发生特异性反应具有良好的反应原性.
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| 关 键 词： | 羊口疮病毒 O2O基因 克隆 原核表达 多克隆抗体 |
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