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| 鸡高迁移率族蛋白B1真核表达载体的构建及鉴定 | |
| 作者姓名： | 高爱俊 钱琨 朱明月 张娜 邵红霞 金文杰 秦爱建 |
| 作者单位： | 扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室;扬州大学教育部禽类预防医学重点实验室;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31101814);教育部高等学校博士点基金(20113250120003);江苏省高校自然科学研究项目(11KJB230003;13KJA230002);公益性行业(农业)科研专项项目(201203055);江苏省优势学科项目 |
| 摘 要： | 为构建鸡高迁移率族蛋白B1(Chicken high mobility group B1 protein,chHMGB1)真核表达载体,并在真核细胞中进行暂态表达和鉴定。研究酶切回收含有鸡高迁移率族蛋白全长基因的PGEM-chHMGB1质粒,将chHMGB1全长与pcDNA3.1(+)载体连接构建pcDNA-chHMGB1全长重组表达质粒。将其质粒采用脂质体转染293T细胞,进行暂态表达,利用Western blotting和间接免疫荧光法对表达的蛋白进行鉴定。结果显示,pcDNA-chHMGB1重组表达质粒克隆片段大小正确,瞬时转染293T细胞,Western blotting在细胞浆和培养上清中同时检测到相对分子量约为30 ku的目的条带;利用chHMGB1特异性抗体进行IFA试验可以检测到目的蛋白的表达。本研究成功构建了鸡高迁移率族蛋白B1的真核表达载体pcDNA-chHMGB1,并且在真核细胞中得以有效表达,从而为进一步研究chHMGB1蛋白的生物学功能提供生物材料。 |
| 关 键 词： | 鸡高迁移率族蛋白B 真核表达 鉴定 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ | |