| 鸡新城疫融合蛋白基因在大肠杆菌中的表达 |
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| 引用本文： | 王忠田,王新卫,陈溥言,申秀琴.鸡新城疫融合蛋白基因在大肠杆菌中的表达[J].河南畜牧兽医(综合版),2000(8). |
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| 作者姓名： | 王忠田 王新卫 陈溥言 申秀琴 |
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| 作者单位： | 河南农业大学牧医工程学院!郑州450002(王忠田，王新卫)，南京农业大学动物医学院(陈溥言)，郑州种畜场(申秀琴) |
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| 摘 要： | 根据NDVNL株的F基因序列，自行设计带有XbaⅠ和XhoⅠ酶切位点的一对引物,应用聚合酶链式反应(PCR)扩增含NDVF基因的PFL质粒,扩增结果与设计相符，大小为630bp。该片段覆盖F基因的2/3的抗原决定簇。对该片段两端酶切后，克隆到融合表达载体pThioHisB中，并转化到大肠杆菌Top10内，利用AMP抗性筛选阳性重组子，并用PCR及双酶切鉴定克隆成功，用IPTG化学诱导表达了F基因。经SDS－PAGE电泳分析，结果在分子量约为35KD处可见到表达的蛋白条带。这与根据核苷酸大小计算的蛋白及融合蛋白之和的大小相符。说明外源片段插入正确表达成功。用HRP标记的兔抗鸡抗体与该条带进行Western－Blot检测，该条带呈阳性反应。进一步证实表达正确。通过蛋白灰度扫描显示表达的融合蛋白占菌体总蛋白的20％。
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| 关 键 词： | 鸡新城疫融合蛋白基因 聚合酶链式反应 原核表达 SDS-PAGE Western-Blot |
High Level Expression of Fusion Gene of NDV in E.coli |
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| Wang zhongtian Wang xinwei Chen puyan.High Level Expression of Fusion Gene of NDV in E.coli[J].Henan Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine,2000(8). |
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| Authors: | Wang zhongtian Wang xinwei Chen puyan |
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| Institution: | Wang zhongtian Wang xinwei Chen puyan |
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