| 传染性造血器官坏死病病毒参考蛋白的研制 |
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| 引用本文： | 王树云,高志强,张旻,谷强,任彤,刘艳华,江育林,张利峰.传染性造血器官坏死病病毒参考蛋白的研制[J].水产学报,2016,40(3):388-395. |
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| 作者姓名： | 王树云 高志强 张旻 谷强 任彤 刘艳华 江育林 张利峰 |
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| 作者单位： | 1. 北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心,北京,100026;2. 中国检验检疫科学研究院,北京,100176 |
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| 基金项目： | 质检公益性项目(201310221) |
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| 摘 要： | 为规避活病毒作参考物质存在的生物安全风险,本研究利用毕赤酵母表达系统表达了传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的糖蛋白来制备参考蛋白,作为IHNV免疫学检测参考物质。本研究选用IHNV糖蛋白基因(IHNV-G)为目的基因,根据Gen Bank中IHNV全基因序列设计特异性引物,以IHNV-uk株病毒核酸为模板,通过RT-PCR获得糖蛋白基因片段,将其克隆至真核表达载体p PICZαA,转入毕赤酵母感受态细胞GS115中,使外源基因与酵母基因融合,通过1%甲醇诱导表达外源蛋白,SDS-PAGE分析显示获得可溶性表达蛋白,分子量大于70 ku。经Western Blot和ELISA分析,该表达产物可以被IHNV多抗特异性识别。0.1531 mg的重组蛋白与0.3125TCID50 IHNV在ELISA实验中反应原性相当,–20°C可稳定保存2个月,说明其在一定程度上可替代病毒作为参考物质。该研究为IHNV ELISA检测试剂盒的开发奠定基础。
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| 关 键 词： | 传染性造血器官坏死病病毒 参考蛋白 毕赤酵母 |
| 收稿时间： | 2015/11/2 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2015/12/9 0:00:00 |
Preparation of reference protein for infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV) |
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| WANG Shuyun,GAO Zhiqiang,ZHANG Min,GU Qiang,REN Tong,LIU Yanhu,JIANG Yulin and ZHANG Lifeng.Preparation of reference protein for infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV)[J].Journal of Fisheries of China,2016,40(3):388-395. |
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| Authors: | WANG Shuyun GAO Zhiqiang ZHANG Min GU Qiang REN Tong LIU Yanhu JIANG Yulin and ZHANG Lifeng |
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| Institution: | Inspection and Quarantine Technical Center of Beijing Enter-exit Inspection and Quarantine BureauChinese Academy of Inspection and Quarantine,Inspection and Quarantine Technical Center of Beijing Enter-exit Inspection and Quarantine BureauChinese Academy of Inspection and Quarantine,,Inspection and Quarantine Technical Center of Beijing Enter-exit Inspection and Quarantine BureauChinese Academy of Inspection and Quarantine,Inspection and Quarantine Technical Center of Beijing Enter-exit Inspection and Quarantine BureauChinese Academy of Inspection and Quarantine,,Inspection and Quarantine Technical Center of Beijing Enter-exit Inspection and Quarantine BureauChinese Academy of Inspection and Quarantine |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | infectious hematopoietic necrosis virus Eukaryotic expression Reference materials |
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