重组酶Xar的表达纯化及性质研究 |
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引用本文: | 王锐丽,叶兆伟,薛业敏.重组酶Xar的表达纯化及性质研究[J].河南农业科学,2016(5). |
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作者姓名: | 王锐丽 叶兆伟 薛业敏 |
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作者单位: | 1. 信阳农林学院生物与制药工程学院,河南信阳,464000;2. 南京师范大学金陵女子学院,江苏南京,210097 |
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基金项目: | 河南省科技攻关项目(132102110047) |
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摘 要: | 为获得高效的半纤维素类饲料酶制剂,将含嗜热厌氧乙醇菌α-阿拉伯糖苷酶/木糖苷酶(Xar)基因的重组质粒p ET-20b-xar导入大肠杆菌DH10B中,经IPTG诱导进行高效表达,将表达的重组酶进行热处理和Ni~(2+)亲和层析纯化,并对纯化的重组酶Xar的性质进行研究。结果表明,以对硝基苯酚-α-阿拉伯呋喃糖苷(p NPAF)为底物,重组酶Xar的最适反应温度和最适p H值分别是75~80℃和6.0,米氏常数(Km)、最大反应速度(Vmax)分别为2.42 mmol/L、20.7μmol/(min·mg);以对硝基苯酚-β-木糖苷(p NPX)为底物,重组酶Xar的最适反应温度和最适p H值分别为93℃和5.8~6.2,Km、Vmax值分别为0.60 mmol/L、43.8μmol/(min·mg)。将重组酶Xar置于80℃保温1 h,木糖苷酶的相对活性仍为56.4%,在p H值4.2~8.2条件下仍保持较高的稳定性。当木糖浓度达到400 mmol/L时,木糖苷酶的相对活性仍有97.9%。Mn~(2+)对重组酶Xar有明显的激活作用,而Cu~(2+)和Zn~(2+)对其有明显的抑制作用。可见,重组酶Xar具有良好的热稳定性。
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关 键 词: | 木糖苷酶 耐热性 纯化 酶学性质 |
Production and Characterization of a Recombinase Xar |
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Abstract: | |
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Keywords: | xylosidase thermostablity purification enzymatic properties |
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