柑橘半胱氨酸蛋白酶基因CsCysP的分离、亚细胞定位及表达分析

以‘奥林达’夏橙[Citrus sinensis（L.）‘Olinda’]为材料，采用RT-PCR结合RACE技术从果萼离层中分离到1个半胱氨酸蛋白酶类基因，命名为CsCysP（GenBank登录号：KJ093387）。该基因的cDNA全长为1 485 bp，开放阅读框（ORF）为1 083 bp，推测可编码360个氨基酸残基的多肽。其基因组序列与cDNA比对后显示有3个内含子。分析发现，CsCysP属于papain-like（木瓜蛋白酶，C1A）家族的半胱氨酸蛋白酶，与拟南芥、大豆、烟草、杨树等的同源蛋白有73% ~ 83%的相似性。亚细胞定位结果显示CsCysP蛋白定位在细胞壁上。qRT-PCR结果表明CsCysP在老叶、成熟果实果萼离层和花中的表达量明显高于幼苗的根、茎、叶。CsCysP的表达被脱落酸、高盐和PEG6000诱导，低温、乙烯、芸薹素内酯、水杨酸和甲基茉莉酸可抑制其表达。利用基因工程手段获得了柑橘过表达CsCysP的5个转基因株系。