| 斑点叉尾(鱼回)LEAP2成熟肽在毕赤酵母中的表达及其抑菌活性 |
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| 引用本文： | 孙立人,陶妍,高北.斑点叉尾(鱼回)LEAP2成熟肽在毕赤酵母中的表达及其抑菌活性[J].上海海洋大学学报,2017,26(1):23-30. |
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| 作者姓名： | 孙立人 陶妍 高北 |
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| 作者单位： | 上海海洋大学,上海海洋大学,上海海洋大学 |
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| 基金项目： | 上海市教育委员会产学研项目(No.15CXY30)和农业部都市农业(南方)重点实验室开放基金(No.UA201307)。 |
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| 摘 要： | LEAP-2 (Liver expressed antimicrobial peptide-2) 抗菌肽是一类主要在动物肝脏中表达的小分子肽,其生物学活性来自成熟肽区域,它们在动物的免疫系统中发挥了重要作用。本文以斑点叉尾鮰 (Ictalurus punctatus) LEAP-2成熟肽(mLEAP2)为研究对象,拟通过建立毕赤酵母表达系统,实现mLEAP2在毕赤酵母中的重组DNA表达,以期获得具生物学活性的重组体mLEAP2 (rmLEAP2),为进一步研究其功能和扩大制备奠定基础。首先以既有的斑点叉尾鮰mLEAP2的原核表达载体“pET-32a-mLEAP2”为模板,通过PCR扩增,获得5’端含EcoRⅠ酶切位点、3’端含NotⅠ酶切位点及6×his标签的LEAP-2成熟肽基因mLEAP2,然后将其与真核表达载体pPIC9K连接,构建重组表达载体“pPIC9K-mLEAP2”；电转化至毕赤酵母GS115细胞中,经不同浓度G418和选择性培养基筛选,获得高拷贝酵母转化子；在29 ℃、250 r/m条件下,以0.5%的甲醇对其诱导表达120 h；采用固化金属离子亲和层析(IMAC)对表达产物进行纯化,通过MALDI-TOF/TOF质谱对纯化产物的结构进行分析和鉴定。结果表明：表达的重组体蛋白为预期的目的蛋白rmLEAP2,其表达量约2.2 mg/L；另一方面,抑菌实验结果显示rmLEAP2具有明显的抑制枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的活性。
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| 关 键 词： | 斑点叉尾鮰 LEAP-2成熟肽 毕赤酵母 重组DNA表达 |
| 收稿时间： | 2016/4/28 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2016/5/12 0:00:00 |
Expression of channel catfish (Ictalurus punctatus) LEAP2 mature peptide in Pichia pastoris and its antibacterial activity |
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| SUN Liren,TAO Yan and GAO Bei.Expression of channel catfish (Ictalurus punctatus) LEAP2 mature peptide in Pichia pastoris and its antibacterial activity[J].Journal of Shanghai Ocean University,2017,26(1):23-30. |
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| Authors: | SUN Liren TAO Yan and GAO Bei |
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| Institution: | Shanghai Ocean University,Shanghai Ocean University,Shanghai Ocean University |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | channel catfish LEAP-2 mature peptide Pichia pastoris recombinant DNA expression |
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