致对虾肝胰腺坏死病副溶血弧菌荧光定量PCR检测方法的建立

【目的】建立一种对虾急性肝胰腺坏死病（Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease）病原菌副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus, VpAHPND）荧光定量 PCR 检测方法，对该病进行快速检测。【方法】根据副溶血弧菌基因保守序列设计特异性引物和探针，经优化反应体系及条件，建立检测 VpAHPND 的荧光定量 PCR 方法；以重组质粒为标准品制作标准曲线，并进行特异性、敏感性、重复性及临床应用试验。【结果】该方法定量范围宽，起始模板浓度范围为 2.3×101~2.3×107 拷贝 /μL 时，标准曲线具有良好的线性关系；最低检测限为 2.3 拷贝/μL，与对虾其他病原菌及病毒无交叉反应，重复试验变异系数为 0.45%~0.69%，可在 1 h 内完成样品检测；对临床对虾样品的检测结果表明，该方法与世界动物卫生组织（OIE）推荐的套式 PCR 法检测结果一致。【结论】应用 TaqMan 探针建立的检测 VpAHPND 的荧光定量 PCR 方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好的特点，可有效用于临床对虾样品的 VpAHPND 检测。

Establishment of Real-time PCR for Detection of Vibrio parahaemolyticus Causing Acute Hepatopancreas Necrosis Disease in Shrimps