| 口蹄疫病毒3D基因真核表达载体pEGFP-3D的构建及其融合蛋白分子在BHK细胞中的定位 |
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| 引用本文： | 毕研丽,沈小燕,丛国正,刘湘涛,常惠芸,才学鹏.口蹄疫病毒3D基因真核表达载体pEGFP-3D的构建及其融合蛋白分子在BHK细胞中的定位[J].华北农学报,2008,23(4). |
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| 作者姓名： | 毕研丽 沈小燕 丛国正 刘湘涛 常惠芸 才学鹏 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,国家口蹄疫参考实验室,甘肃兰州730046 |
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| 摘 要： | 为研究口蹄疫病毒RNA聚合酶3D基因的分子生物学特性及定位,构建了3D基因真核表达载体pEGFP-3D,观察了3D在BHK-21细胞中的瞬时表达情况.从重组质粒pMDl8.T-3D扩增到3D基因,与pGEM-T easy载体连接,将鉴定为阳性的重组质粒pGEM-3D与表达载体pEGFP-N1分别经Barn H Ⅰ/Hind Ⅲ酶切,进行定向亚克隆;重组表达质粒pEGFP-3D经PCR、酶切鉴定.阳性质粒进行测序.利用脂质体介导阳性pEGFP-3D质粒转染BHK-21细胞.免疫组化检测转染细胞中3D基凶表达情况和3D基因在细胞中的定位,Western blotting验证pEGFP-3D融合基因的表达.结果表明,成功构建了重组表达质粒pEGFP-3D,并在BHK-21细胞中进行了表达.免疫组化分析表明,3D蛋白主要定位于细胞核;Western blotting证实pEGFP-3D融合蛋白在80 kDa处出现阳性条带,说明表达的外源蛋白具有免疫活性.pEGFP-3D表达载体转染细胞后很快就能通过观察荧光蛋白而检测出基因的瞬时表达情况,为基因转染研究中确定转染效率、3D的表达情况及蛋白定位等提供了直观的靶标,有望应用于FMDV聚合酶分子的生物学特性研究.
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| 关 键 词： | 13蹄疫病毒 pEGFP-3D表达载体 定位 免疫活性 |
Construction of pEGFP-3D Eukaryotic Expression Vector of FMDV 3D Gene and Expression and Localization of Fusion Protein Molecule in BHK-21 Cells |
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| BI Yan-li,SHEN Xiao-yan,CONG Guo-zheng,LIU Xiang-tao,CHANG Hui-yun,CAI Xue-peng.Construction of pEGFP-3D Eukaryotic Expression Vector of FMDV 3D Gene and Expression and Localization of Fusion Protein Molecule in BHK-21 Cells[J].Acta Agriculturae Boreali-Sinica,2008,23(4). |
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| Authors: | BI Yan-li SHEN Xiao-yan CONG Guo-zheng LIU Xiang-tao CHANG Hui-yun CAI Xue-peng |
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