| H1亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 郭捷,谢芝勋,罗思思,刘加波,邓显文,谢志勤,庞耀珊,范晴.H1亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立[J].动物医学进展,2013,34(7). |
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| 作者姓名： | 郭捷 谢芝勋 罗思思 刘加波 邓显文 谢志勤 庞耀珊 范晴 |
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| 作者单位： | 1. 广西大学动物科技学院,广西南宁,530004
2. 广西兽医研究所,广西疫苗新技术重点实验室,广西南宁530001 |
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| 基金项目： | 广西科技项目，广西特聘专家专项，广西科技攻关重大专项，广西自然科学基金项目 |
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| 摘 要： | 本研究旨在建立一种检测H1亚型禽流感病毒(AIV)的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法.根据对GenBank中H1亚型AIV HA基因序列的分析,设计针对H1亚型AIV的HA基因特异性引物,并以H1亚型AIV的cDNA为模版,构建重组阳性质粒.采用梯度稀释重组标准品阳性质粒DNA的方法,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(real-time PCR)标准曲线.敏感性试验结果显示,扩增效率和标准误差分别为100.9％和0.011 7,熔解曲线呈单一熔解峰.在35个Ct值内该方法可检测到100个拷贝的标准品DNA；特异性试验结果显示,该方法对于其他亚型AIV和禽呼吸道病原体不能检出；重复性试验结果显示,组内变异系数小于1％.建立的Real-time PCR具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于临床上H1亚型AIV的检测.
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| 关 键 词： | H1亚型AIV SYBR Green Ⅰ 实时荧光定量PCR |
Development of Real-time Fluorescent Quantitative PCR Assay for Detection of Avian Influenza Virus H1 Subtype |
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