V5标记的猪圆环病毒2型Cap蛋白重组杆状病毒表达载体的构建 |
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引用本文: | 徐国,梁海英,曾智勇,王彬,黄涛,汤德元,代振江,叶百川,张爱琼,何小莉,咸文.V5标记的猪圆环病毒2型Cap蛋白重组杆状病毒表达载体的构建[J].中国畜牧兽医,2018(7). |
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作者姓名: | 徐国 梁海英 曾智勇 王彬 黄涛 汤德元 代振江 叶百川 张爱琼 何小莉 咸文 |
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作者单位: | 贵州大学动物科学学院 |
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摘 要: | 试验旨在利用真核表达系统构建V5标记的猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白的表达载体。采用基因工程技术将V5标签引入到PCV2 ORF2基因C末端,并将标记基因定向克隆入pFastBacHTA载体,将pFastBacHTA-ORF2-V5重组转移载体转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,使用脂质体介导法将鉴定后的重组杆状病毒质粒转染于Sf9细胞中;运用间接免疫荧光试验(IFA)、SDS-PAGE和Western blotting试验对Sf9细胞中V5标记Cap蛋白的表达进行验证。结果显示,本试验成功将V5标签引入到PCV2 ORF2基因末端,pFastBacHTAORF2-V5重组转移载体转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞后获得了Bacmid-ORF2-V5重组杆状病毒质粒;IFA、SDS-PAGE和Western blotting试验结果显示,在Sf9细胞中能检测到重组杆状病毒V5标记的PCV2Cap蛋白,具有良好的反应原性,说明本试验成功获得一株rAcMNPV Cap-V5重组杆状病毒。试验结果为PCV2标记亚单位疫苗的研制提供一定的理论依据。
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