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| 家蝇幼虫双翅肽MdDpt I成熟肽基因的克隆与原核表达 | |
| 引用本文： | 孙小宁,马红霞.家蝇幼虫双翅肽MdDpt I成熟肽基因的克隆与原核表达[J].中国兽药杂志,2015,49(1):1-5. |
| 作者姓名： | 孙小宁 马红霞 |
| 作者单位： | 1. 吉林农业大学动物科学科技学院,长春,130118 2. 辽宁省农业经济学校,辽宁锦州,121001 3. 吉林农业大学动物科学科技学院，长春130118; 吉林农业大学动物生产及产品质量安全教育部重点实验室，长春130118 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(31140026); 教育部新世纪优秀人才项目(NCET-10-0174);吉林省世行贷款农产品质量安全项目(2011-Y05); 吉林省科技发展计划项目(20111820, 20120229) |
| 摘 要： | 对鸡沙门氏菌诱导家蝇幼虫构建的抑制性消减文库(SSH)中筛选得到的家蝇双翅肽I(Musca domesticaDiptericin I,MdDptI)基因进行克隆、表达,并对表达产物的抑菌活性进行初步研究。以沙门氏菌诱导家蝇幼虫cDNA为模板,采用cDNA末端快速扩增技术(RACE),对MdDptI基因进行扩增,并对扩增产物进行测序和生物信息学分析,进一步去掉信号肽并构建重组表达质粒pET-28a-MdDptI,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析。借助亲和纯化获得目的蛋白,并验证目的蛋白的生物活性。MdDptI基因全长为419 bp,包含一个300 bp的完整开放阅读框(ORF),编码99个氨基酸,其cDNA序列与GenBank中登录号为FJ794602.1的家蝇双翅肽基因同源性为95%。构建了家蝇MdDptI基因的成熟肽原核表达质粒pET-28a-MdDpt-I,并获得成功表达,表达产物约为12 ku,与预期结果一致。纯化后的目的蛋白表现出一定的抑菌活性。本试验获得了MdDptI基因的全长序列,构建了原核表达载体,并成功获得表达纯化。 |
| 关 键 词： | 家蝇 家蝇双翅肽 克隆 序列分析 原核表达 |
| 收稿时间： | 2014/9/14 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2014/12/15 0:00:00 |
Cloning and prokaryotic express of diptericin I gene MdDpt I mature peptide chain in Musca domestica larvae |
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| SUN Xiao-ning , PEI Zhi-hua , BIAN Lu , ZHANG Dan-dan , MA Hong-xia.Cloning and prokaryotic express of diptericin I gene MdDpt I mature peptide chain in Musca domestica larvae[J].Chinese Journal of Veterinary Drug,2015,49(1):1-5. | |
| Authors: | SUN Xiao-ning PEI Zhi-hua BIAN Lu ZHANG Dan-dan MA Hong-xia |
| Institution: | Jilin Agricultural University, |
| Abstract: | |
| Keywords: | Musca domestica Musca domestica Diptericin Clone Sequence analysis Prokaryotic expression |
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