SMAD1基因对黔北麻羊卵巢颗粒细胞的影响及组织表达分析

旨在验证SMAD1基因在转录组测序中单羔组对多羔组上调的结果，并探究SMAD1基因对黔北麻羊产羔性状的影响。本试验选取健康、体重45 kg、4岁左右的单、多羔黔北麻羊母羊为研究对象，采用qRT-PCR法检测SMAD1基因在单、多羔组黔北麻羊母羊子宫、输卵管、垂体、下丘脑及卵巢组织的表达水平，PCR扩增黔北麻羊SMAD1基因CDS区，构建pEGFP-N3-SAMD1重组质粒，利用脂质体转染法转染pEGFP-N3-SAMD1重组质粒进入卵巢颗粒细胞，分为超表达SMAD1试验组和pEGFP-N3空载体对照组，通过检测培养基中雌二醇和孕酮的浓度，利用CCK-8法和Annexin V-FITC法检测超表达SMAD1基因对卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响，qRT-PCR检测超表达SMAD1基因对SAMD1、GnRHR、FSHR、BMP4、TIMP3基因mRNA表达的影响，来探究SMAD1基因对卵巢颗粒细胞的影响。结果表明，SMAD1基因在黔北麻羊各组织中均有表达。组间比较可知，卵巢和下丘脑组织单羔组极显著高表达于多羔组（P<0.01），输卵管组织中单羔组显著高表达于多羔组（P<0.05），其他组织未达到差异显著性（P>0.05）。本研究成功克隆了SMAD1基因CDS序列，未发现突变位点，并将pEGFP-N3-SAMD1重组质粒转染进入卵巢颗粒细胞，转染试验组培养基中E2含量在12、48 h显著高于对照组（P<0.05），P4含量在12 h显著高于对照组（P<0.05）；超表达SMAD1基因对细胞增殖在24 h达到显著促进作用（P<0.05），48、72 h达到极显著促进作用（P<0.01），并且发现超表达SMAD1基因对卵巢颗粒细胞的凋亡具有抑制作用，与SMAD1基因对卵巢颗粒细胞增殖具有促进的结果是相符的。SMAD1基因超表达后繁殖相关基因GnRHR、FSHR、BMP4、TIMP3 mRNA的表达极显著降低（P<0.01）。综上表明，SMAD1基因超表达可提高E2、P4的生成，有助于黔北麻羊发情及妊娠的维持，促进细胞增殖，抑制细胞凋亡，也极显著抑制繁殖相关基因mRNA的表达，而这些繁殖相关基因都能够调控卵泡数、卵泡的发育与形成以及排卵。因此，SMAD1基因能够抑制这些基因的表达，致使黔北麻羊单羔组受胎率低，进而降低产羔数，这为产羔性状相关基因的研究提供了理论基础，初步认为SMAD1基因可作为探究影响山羊产羔性状的候选基因。

Effect of SMAD1 Gene on Ovarian Granulosa Cells and Its Tissue Expression Analysis in Qianbei Ma Goats