选择性培养基结合特异引物法分离鉴定家兔肠道脆弱拟杆菌

脆弱拟杆菌作为严格厌氧菌,对培养环境要求苛刻,分离培养有较大难度。试验通过改进的选择性培养结合特异引物方法分离兔源脆弱拟杆菌,并利用16srDNA测序对其进行鉴定,为后续研究其与宿主关系奠定基础。试验从健康青年家兔肠道中采集内容物,先接种于含液态选择性培养基的厌氧管中,进行富集培养1~2d,然后将培养的菌液稀释后接种到选择性培养基平板上,于厌氧罐中培养1~3d,待长出菌落后,观察菌落形态,挑选符合脆弱拟杆菌菌落特点的单一菌落,培养后提取DNA,以脆弱拟杆菌特异引物进行PCR检测。对扩增出特异条带的菌株,扩增其16srDNA序列,并进行测序,测序结果与GenBank中脆弱拟杆菌序列进行比对,以鉴定分离的菌株。结果表明,细菌为大小不一的杆菌,革兰氏染色呈阴性。特异引物PCR产物电泳检测显示,挑取的27株单一菌落中,有7株可以扩增出符合目的片段大小的产物。随机选取两株进行16srDNA测序,其序列与GenBank中的递交的脆弱拟杆菌序列相似度大于99%,与其他细菌相似度均小于93.43%,可确定分离到的菌株为脆弱拟杆菌。

Isolation and Identification of Rabbit Intestinal Bacteroides Fragilis by Selective Medium Combining with Specific Primers