| 慢病毒生产卵泡抑素转基因绵阳PCR检测方法的建立(英文) |
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| 引用本文： | 张宁,王晨懿,张雪梅,刘晨曦,贺三刚,李文蓉,刘明军.慢病毒生产卵泡抑素转基因绵阳PCR检测方法的建立(英文)[J].农业科学与技术,2014(7):1095-1099. |
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| 作者姓名： | 张宁 王晨懿 张雪梅 刘晨曦 贺三刚 李文蓉 刘明军 |
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| 作者单位： | 农业部草食家畜遗传育种与繁殖重点实验室;新疆维吾尔自治区动物生物技术重点开放实验室;新疆维吾尔自治区畜牧科技学院生物技术研究中心,新疆乌鲁木齐830000 |
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| 基金项目： | 国家转基因重大专项（2013ZX-08008-003-04,2013ZX08010-004-009）. |
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| 摘 要： | 目的]建立稳定快速的慢病毒转基因羊DNA水平检测方法。方法]采集初生转基因羔羊的子叶、脐带、尾组织以及死亡羔羊的全身各组织,提取基因组DNA作为模板进行PCR检测,以Follistatin基因N+D1片段特异性引物进行PCR检测;同时,对慢病毒载体的CMV启动子、5’-LTR等结构元件进行PCR检测;提取死亡羔羊的全身组织以及转基因羔羊的活体肌肉组织总RNA,进行RTPCR检测。结果]采用试剂盒提取的基因组DNA比常规方法提取的DNA快速、高效,且更易被检测,扩增时的引物采用载体上游与目标基因下游的组合大大增加了检测的特异性,避免了内源性目标基因的干扰而造成假阳性;初生转基因羔羊的尾组织可作为PCR检测的组织样品,其结果可靠、准确;对CMV启动子及5’-LTR等结构元件作PCR检测为转基因动物的安全性考察提供了数据,同时验证了转基因羔羊目的基因的检测结果;对转基因羔羊肌肉组织提取总RNA后进行RT-PCR检测,其中有3只羔羊没有检测到转录产物,其他均有转录。结论]该研究建立的转基因绵羊PCR检测方法高效、快速且准确,为进一步蛋白水平检测提供试验依据,也为建立转基因绵羊系统性多层次的检测方法奠定基础,还为转基因绵羊的安全监测提供了稳定的技术平台。
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| 关 键 词： | FS N+D1 慢病毒卵周隙显微注射 转基因绵羊 PCR方法 |
Establishment of a Technique to PCR Detection about Follistatin Transgenic Sheep by Injection of Lentivirus |
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| Ning ZHANG,Chenyi WANG,Xuemei ZHANG,Chenxi LIU,Sangang HE,Wenrong LI,Mingjun LIU.Establishment of a Technique to PCR Detection about Follistatin Transgenic Sheep by Injection of Lentivirus[J].Agricultural Science ＆ Technology,2014(7):1095-1099. |
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| Authors: | Ning ZHANG Chenyi WANG Xuemei ZHANG Chenxi LIU Sangang HE Wenrong LI Mingjun LIU |
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| Institution: | (Key Laboratory of Genetics, Breeding and Reproduction of Grass Feeding Livestock, Ministry of Agriculture; Key Lab of Animal Biotechnological of Xinjiang, Biotechnological Center, Xinjiang Academy of Animal Science, Urumqi 830000, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Follistatin N ＋D1 domain Lentiviral perivitelline space microinjection Transgenic sheep PCR method |
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