| 拟南芥Dof1基因原核表达载体的构建及应用 |
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| 引用本文： | 王艺霖,赵丽伟,李昆志.拟南芥Dof1基因原核表达载体的构建及应用[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2013,41(2):195-202. |
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| 作者姓名： | 王艺霖 赵丽伟 李昆志 |
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| 作者单位： | 昆明理工大学 生物工程技术研究中心;昆明理工大学 生物工程技术研究中心;昆明理工大学 生物工程技术研究中心 |
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| 基金项目： | 云南省中青年学术与技术后备人才培养基金项目（2006PY01-10） |
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| 摘 要： | 【目的】构建拟南芥转录因子Dof1基因的原核表达载体,进行原核表达并制备其蛋白抗体。【方法】利用RT-PCR方法从拟南芥中克隆转录因子Dof1基因,将其连接到原核表达载体pET-32a(+)上,构建重组原核表达载体pET32a(+)-Dof1,经酶切鉴定和测序验证后将其转化至大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导后,纯化重组蛋白,以分离到的重组蛋白为抗原免疫小鼠制备抗血清,检测植物中Dof1蛋白表达水平。【结果】成功构建了拟南芥转录因子Dof1基因的原核表达载体pET32a(+)-Dof1,在28℃、1mmol/L IPTG诱导6h的大肠杆菌中可高效表达分子质量约为42ku的重组蛋白,其分泌到细胞质中,不形成包涵体;Western-blotting检测结果证明,制备的抗血清有较好的抗原-抗体识别反应。【结论】成功实现了Dof1基因的原核表达,制备出的重组蛋白Dof1多克隆抗体可用于植物Dof蛋白表达水平的检测,可为Dof1基因的进一步研究奠定基础。
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| 关 键 词： | Dof 转录因子 载体构建 原核表达 |
| 收稿时间： | 2012/5/24 0:00:00 |
Construction and application of prokaryotic expression plasmid containing Dof1 gene of Arabidopsis thaliana |
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| WANG Yi-lin,ZHAO Li-wei,LI Kun-zhi.Construction and application of prokaryotic expression plasmid containing Dof1 gene of Arabidopsis thaliana[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2013,41(2):195-202. |
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| Authors: | WANG Yi-lin ZHAO Li-wei LI Kun-zhi |
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| Institution: | (Biotechnology Research Center,Kunming University of Science and Technology,Kunming,Yunnan 650500,China) |
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