| 禽流感病毒通用型及H5亚型套式荧光RT-PCR 检测方法研究 |
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| 引用本文： | 杨素,廖秀云,廖明,沙才华,徐海聂,曹伟胜,陈伟生.禽流感病毒通用型及H5亚型套式荧光RT-PCR 检测方法研究[J].中国畜牧兽医,2012,39(3):165-171. |
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| 作者姓名： | 杨素 廖秀云 廖明 沙才华 徐海聂 曹伟胜 陈伟生 |
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| 作者单位： | 1. 珠海出入境检验检疫局,广东珠海,519015
2. 华南农业大学,广东广州,510642 |
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| 基金项目： | 广东省农产品安全生产关键技术研究与示范重点专项(2009A020101006);广东省农业攻关项目(2007B020803004);质检总局科技项目(2008IK025);珠海市科技项目(PC20071055) |
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| 摘 要： | 将套式PCR与荧光RT-PCR技术相结合,叠加这两种技术在敏感性和特异性方面的优势,建立敏感性高于常规荧光RT-PCR的套式荧光RT-PCR检测方法。从GenBank下载禽流感病毒NP基因和HA基因序列,通过比对选取较为保守的片段,设计AIV通用型及H5亚型套式荧光RT-PCR引物和TaqMan探针;利用体外转录技术制备阳性对照,构建目的片段重组质粒;经反应体系和反应条件的优化,建立套式荧光RT-PCR检测方法。试验结果表明,该方法可特异性地检测禽流感病毒及H5亚型AIV,在30份鱼类养殖水样中检测到19份阳性样品,具有较高的敏感性和良好的特异性;具有高通量、快速的特点,可对大批量样品同时进行检测,试验耗时仅需5 h,是自然环境样品中极微量禽流感病毒检测的好方法。
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| 关 键 词： | 禽流感病毒 通用型 H5亚型 套式荧光RT-PCR 检测方法 |
Development of Nested Real-time RT-PCR for Detection of Influenza A Viruse and Subtype H5 |
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| YANG Su
,
LIAO Xiu-yun
,
LIAO Ming
,
SHA Cai-hua
,
XU Hai-nie
,
CAO Wei-sheng
,
CHEN Wei-sheng.Development of Nested Real-time RT-PCR for Detection of Influenza A Viruse and Subtype H5[J].China Animal Husbandry & Veterinary Medicine,2012,39(3):165-171. |
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| Authors: | YANG Su LIAO Xiu-yun LIAO Ming SHA Cai-hua XU Hai-nie CAO Wei-sheng CHEN Wei-sheng |
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| Institution: | 1. Zhuhai Entry-Exit Inspection & Quarantine Bureau,Zhuhai 519015,China;2. South China Agricultural University,Guangzhou 510642,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | influenza A viruse general type subtype H5 nested real-time RT-PCR detection method |
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