| 绵羊Myostatin基因真核表达载体的构建及在其原代成纤维细胞中的瞬时表达 |
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| 引用本文： | 陆健,宋正海,吕延飞,赵福平,张莉,魏彩虹,范广习,丁家桐,李碧春,杜立新.绵羊Myostatin基因真核表达载体的构建及在其原代成纤维细胞中的瞬时表达[J].中国畜牧兽医,2012,39(5):14-19. |
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| 作者姓名： | 陆健 宋正海 吕延飞 赵福平 张莉 魏彩虹 范广习 丁家桐 李碧春 杜立新 |
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| 作者单位： | 1. 扬州大学动物科学与技术学院, 江苏扬州 225009;2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 国家畜禽分子遗传育种中心, 北京 100193;3. 苏州市吴中区东山动物防疫站, 江苏苏州 215128;4. 德州市畜牧兽医局, 山东德州 253015 |
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| 基金项目： | 转基因生物新品种培育重大专项——转基因肉羊育种新材料创制课题 |
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| 摘 要： | Myostatin(MSTN)基因是胚胎期肌肉形成和出生后骨骼肌生长的主要调控因子之一,通过抑制肌细胞的扩增和分化而调控肌肉的生长和发育。为了进一步揭示MSTN在绵羊成纤维细胞中的生物学功能,采用RT-PCR从绵羊肌肉组织中扩增MSTN基因,将其cDNA终止密码子TGA删除,采用定向克隆技术连接到带有水母绿色荧光蛋白(AcGFP)报告基因的真核表达载体pAcGFP-N1中,构建融合蛋白重组质粒,经XhoⅠ/SacⅡ双酶切、测序鉴定后,用脂质体介导质粒转染绵羊原代成纤维细胞,观测荧光表达及用RT-PCR和Western blotting方法检测基因转录、蛋白质表达情况。结果表明,成功克隆绵羊MSTN基因,通过PCR方法在MSTN阅读框两端引入了XhoⅠ和SacⅡ克隆位点,成功构建pAcGFP-MSTN融合蛋白真核表达载体,重组质粒转染绵羊成纤维细胞24 h后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,通过RT-PCR扩增出1138 bp的转录产物,并用Western blotting检测到78 ku目的蛋白的表达。本试验为研究MSTN基因在成纤维细胞和脂肪分化调控中的具体机制奠定基础。
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| 关 键 词： | myostatin 绵羊成纤维细胞 真核表达载体 |
| 收稿时间： | 2012-02-20 |
Construction and Transfection of Sheep Myostatin Expression Vector pAcGFP-MSTN in Sheep Fibroblasts |
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| LU Jian
,
SONG Zheng-hai
,
LV Yan-fei
,
ZHAO Fu-ping
,
ZHANG Li
,
WEI Cai-hong
,
FAN Guang-xi
,
DING Jia-tong
,
LI Bi-chun
,
DU Li-xin.Construction and Transfection of Sheep Myostatin Expression Vector pAcGFP-MSTN in Sheep Fibroblasts[J].China Animal Husbandry & Veterinary Medicine,2012,39(5):14-19. |
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| Authors: | LU Jian SONG Zheng-hai LV Yan-fei ZHAO Fu-ping ZHANG Li WEI Cai-hong FAN Guang-xi DING Jia-tong LI Bi-chun DU Li-xin |
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| Institution: | 1. College of Animal Science and Technology, Yangzhou University, Yangzhou 225009, China;2. National Center for Molecular Genetics and Breeding of Animal, Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China;3. Animal Epidemic Prevention Station of Suzhou Dongshan, Suzhou 215128, China;4. Animal Husbandry Bureau of Dezhou, Dezhou 253015, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | myostatin sheep fibroblasts cell eukaryotic expression vector |
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