传染性脾肾坏死病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为建立传染性脾肾坏死病毒（infection spleen and kidney necrosis virus,ISKNV）的定量快速检测方法，根据GenBank中的ISKNV衣壳蛋白（MCP）编码基因保守序列设计一对特异性引物和探针，建立了ISKNV TaqMan荧光定量PCR检测方法，并对其特异性、敏感性和重复性进行了检测。结果显示：以重组质粒标准品构建的标准曲线相关系数为0.997，具有良好的线性关系；检测下限为10 copies/μL，敏感性是常规PCR的10倍；对传染性造血器官坏死病毒、病毒性神经坏死病毒、黄颡鱼杯状病毒、大口黑鲈虹彩病毒、鳜鱼弹状病毒的检测结果均为阴性，仅ISKNV检测结果为阳性；批次内和批次间的变异系数均小于2%。应用建立的方法对已知结果的233份临床样品进行检测，检出76份阳性、157份阴性，与已知结果一致。结果表明，建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法具有敏感、快速、特异以及可定量、重复性好等优点，可用于ISKNV感染的快速鉴别诊断、定量检测以及分子流行病学调查。