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| 非洲猪瘟病毒CD2v蛋白阻断ELISA候选单克隆抗体的筛选及免疫学特性鉴定 | |
| 作者姓名： | 王彩霞 史喜菊 冯春燕 于浩洋 仇松寅 刘晓飞 陈冬杰 贾红 吴绍强 林祥梅 |
| 作者单位： | 1. 中国检验检疫科学研究院动物检验与检疫研究所;2. 中国海关科学技术研究中心;3. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 |
| 摘 要： | 为制备非洲猪瘟病毒CD2v蛋白阻断ELISA候选单克隆抗体,并探究其免疫学特性,以真核表达的CD2v蛋白免疫BALB/c小鼠,经两次免疫后采集小鼠血清,以间接ELISA检测小鼠多抗血清效价。对血清效价最高的小鼠进行加强免疫后,取脾脏进行细胞融合。通过有限稀释法筛选能够稳定分泌CD2v单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用小鼠体内诱生腹水法和辛酸-硫酸铵法获得纯化的CD2v单克隆抗体,对其进行免疫学特性检测。间接ELISA试验显示,4号小鼠血清效价最高(1:72 900),选取该小鼠脾脏进行细胞融合,经过筛选得到4株杂交瘤细胞,分别命名为21D10、21G8、36A3和38G8,亚型鉴定均为IgG1/κ,经检测36A3 ELISA效价最高,可达1:2.187×105。免疫荧光试验显示,36A3抗体能与细胞内表达的CD2v蛋白发生特异性反应,而与携带His标签的p30蛋白无交叉反应;特异性鉴定结果显示,36A3抗体特异性良好,与猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒以及非洲猪瘟病毒p72蛋白均无反应;亲和力检测显示,36A3抗体亲和力较高,亲和... |
| 关 键 词： | 非洲猪瘟病毒 CD2v蛋白 动物免疫 单克隆抗体 阻断ELISA |