| 两种启动子拯救猪繁殖与呼吸综合征病毒ZJ-JX-2015株效率的比较研究 |
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| 引用本文： | 阚恩晞,祝徐航,张孝辉,董婉玉,宋厚辉,周兴东,王晓杜.两种启动子拯救猪繁殖与呼吸综合征病毒ZJ-JX-2015株效率的比较研究[J].中国预防兽医学报,2023(5):529-534. |
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| 作者姓名： | 阚恩晞 祝徐航 张孝辉 董婉玉 宋厚辉 周兴东 王晓杜 |
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| 作者单位： | 浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(3197656)； |
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| 摘 要： | 为比较不同启动子驱动的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)强毒株ZJ-JX-2015感染性克隆拯救的各重组病毒的效率，本研究将ZJ-JX-2015株全基因组引入无义突变位点(C-G，形成Bst B I酶切位点)作为后期鉴定标签并分成4段经PCR扩增后，分别克隆至含CMV启动子的p SMART-BAC载体和含T7启动子的p WSK-29载体中构建感染性克隆质粒p SMART-BAC-CMV-r PRRSV和p WSK-29-T7-r PRRSV，经PCR及测序鉴定正确后将前者分别转染BHK-21和293T细胞；将后者转染BHK-21 (T7)细胞。48 h后收集上述各细胞上清液接种Marc-145细胞并连续传10代。通过观察细胞病变(CPE)，收集不同代次Marc-145细胞上清液经PCR及间接免疫荧光试验(IFA)鉴定拯救的各重组病毒。将拯救的各重组病毒以MOI 0.1接种Marc-145细胞，通过测定不同时间各病毒上清液的病毒效价(TCID50)绘制生长曲线。结果显示，各细胞上清液BHK-21、293T细胞及BHK-21细胞(T7)]在Marc-145细胞中传至第2代时均出现CPE...
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| 关 键 词： | 猪繁殖与呼吸综合征病毒 反向遗传 感染性克隆 |
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