湿加松的SSR反应体系优化

对湿加松SSR反应体系中模板DNA的用量、Mg^2＋浓度、dNTPs及Taq酶的用量、变性温度、退火温度、反应循环次数共7个影响SSR扩增效果的因素,逐一设置单因素多水平进行试验,以目测比较确定谱带条数、亮度、清晰度、背景透明度以及结果的重复性等为判定反应条件适合程度的指标,其反应体系为25uL,扩增程序经优化后确定为：10ng的模板、1×PCR缓冲液、2．5mM的Mg^2＋、0．2mMdNTPs、0．6UTaq酶、正反向引物各0．2uM;最优反应程序为94℃预变性2min之后进入循环,每个循环94℃变性45s,退火45S,72℃延伸45S。退火温度从Tm开始,每隔2个循环降低1℃,直至（Tm-10℃）,维持40个循环。循环结束,72℃延伸5min。