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| 旋毛虫新生幼虫期特异性T314全长cDNA的克隆及表达 | |
| 引用本文： | 吴秀萍,刘明远,陈启军,卢强,付宝权,姚春雨,P.Boireau.旋毛虫新生幼虫期特异性T314全长cDNA的克隆及表达[J].中国兽医学报,2003,23(2):169-171. |
| 作者姓名： | 吴秀萍 刘明远 陈启军 卢强 付宝权 姚春雨 P.Boireau |
| 作者单位： | 1. 解放军军需大学军事兽医系,吉林,长春,130062 2. 瑞典微生物与肿瘤生物学研究中心 3. 解放军军需大学军事兽医系,吉林,长春,130062;法国食品卫生安全局,巴黎,94703 4. 法国食品卫生安全局,巴黎,94703 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 (NSFC3 0 170 70 9)，军队杰出中青年基金资助项目 (0 1J0 17) |
| 摘 要： | 利用PCR将旋毛虫新生幼虫期特异性全长T314cDNA的信号肽祛作后重组到原核表达载体pET-28a。将重组质粒pET28-T314转入克隆菌DH5a和表达菌DE3，分别提取质粒进行酶切，测序鉴定。用KIPTG诱导培养重组表达菌DE3，做菌体裂解物外源表达产物的SDS－PAGE分析。将重组质粒表达的融合蛋白免疫家兔制备抗血清，采用Western blot检测T314cDNA在旋毛虫不同发育时期的表达情况及其天然表达产物的相对分子质量。测序结果显示：外源T314cDNA的PCR产物在重组质粒pET28-T314中阅读框架正确；SDS－PAGE分析结果显示：经IPTG诱导后转化菌DE3的裂解产物与对照菌相比出现了1条相对分子质量约为39000的新条带，大小与外源cDNA融合蛋白的理论推导值38800相符；Western blot检测结果显示：T314cDNA的天然表达产物仅存在旋毛虫新生幼虫，不存在于成虫与肌幼虫，且相对分子质量大小与其在原核重组质粒中表达产物相同。 |
| 关 键 词： | 新生幼虫 旋毛虫 T314cDNA 基因克隆 基因表达 特异性基因 |
| 文章编号： | 1005-4545(2003)02-0169-03 |
| 修稿时间： | 2002年8月19日 |
Cloning and Expression of a T314 cDNA of Trichinella spiralis |
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| P.Boireau.Cloning and Expression of a T314 cDNA of Trichinella spiralis[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2003,23(2):169-171. | |
| Authors: | PBoireau |
| Abstract: | The cDNA library of newborn larvae was screened by a probe T 314 . The positive clone contains a cDNA of 1 250 bp in length with an open reading frame (OFR) of 1 014 bp . The cDNA encodes a peptide of 338 amino acid residues. The signal peptide sequence in the N terminal was dispelled by PCR with the primer 1 and primer 2. The recombinant protein was expressed in pET-28a expression system and the potential function of the fusion protein were also analyzed. |
| Keywords: | Trichinella spiralis T 314 cDNA cloning expression |
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