| 单一引物标记LUX荧光RT-PCR鉴别BTV和EHDV |
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| 引用本文： | 张彩虹,花群义,阮周曦,杨俊兴,曾少灵,陶虹,陈兵,曹琛福,林庆燕,周晓黎.单一引物标记LUX荧光RT-PCR鉴别BTV和EHDV[J].动物医学进展,2010,31(3):6-11. |
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| 作者姓名： | 张彩虹 花群义 阮周曦 杨俊兴 曾少灵 陶虹 陈兵 曹琛福 林庆燕 周晓黎 |
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| 作者单位： | 1. 深圳出入境检验检疫局,广东深圳,518010
2. 云南出入境检验检疫局,云南昆明,650228 |
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| 基金项目： | 国家863计划项目(2006AA10Z445) |
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| 摘 要： | 采用在线LUXTM专业软件,根据BTV-NS3基因序列和EHDV-NS3基因序列,通过特异性单一引物序列3′末端的荧光标记,分别设计出两对BTV和EHDV的LUX荧光PCR引物,并采用BLAST软件对各引物进行匹配性和特异性分析,根据分析结果选择合适的引物合成。经过各反应条件的优化和特异性、敏感性试验,并对BTV、EHDV、VSV、PPRV、BVDV、AKV的BHK-21细胞培养物和临床样品检测,与常规RT-PCR进行对比检测,建立了能同时鉴别检测BTV和EHDV的二重LUXTM荧光PCR方法。该二重LUXTM荧光PCR的BTV和EHDV各自引物只对相应的病毒呈阳性反应,两者没有交叉反应现象,对健康牛、羊和猪基因组DNA、BKH-21细胞对照,以及其他几种相似疾病如VSV、PPRV、BVDV、AKV均呈阴性反应。该法对病毒的细胞培养液鉴别检测敏感性可达1TCID50C以上,比常规RT-PCR敏感性提高10倍以上,从样品核酸纯化到完成二重LUXTM荧光PCR反应和熔解曲线分析,仅需3h,在进出口动物检验检疫中快速鉴别BTV和EHDV具有实际应用价值。
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| 关 键 词： | LUX荧光RT-PCR 蓝舌病病毒 流行性出血病病毒 |
Simultaneous Detection and Differentiation of Bluetongue and Epizootic Hemorrhagic Disease Viruses Using Multiplex LUX Real-time PCR |
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| ZHANG Cai-hong,HUA Qun-yi,RUAN Zhou-xi,YANG Jun-xing,ZENG Shao-ling,TAO Hong,CHEN Bing,CAO Chen-fu,LIN Qing-yin,ZHOU Xiao-li.Simultaneous Detection and Differentiation of Bluetongue and Epizootic Hemorrhagic Disease Viruses Using Multiplex LUX Real-time PCR[J].Progress In Veterinary Medicine,2010,31(3):6-11. |
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| Authors: | ZHANG Cai-hong HUA Qun-yi RUAN Zhou-xi YANG Jun-xing ZENG Shao-ling TAO Hong CHEN Bing CAO Chen-fu LIN Qing-yin ZHOU Xiao-li |
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| Institution: | 1.Shenzhen Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau;Shenzhen;Guangdong;518010;China;2.Yunnan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau;Kunming;Yunnan;650228;China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | LUX real-time RT-PCR Bluetongue virus Epizootic hemorrhagic disease virus |
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