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抗哈维氏弧菌脂多糖单克隆抗体的制备及其鉴定
作者姓名:郝贵杰  沈锦玉  潘晓义  曹铮  尹文林
作者单位:浙江省淡水水产研究所,浙江,湖州,313001;浙江省淡水水产研究所,浙江,湖州,313001;浙江省淡水水产研究所,浙江,湖州,313001;浙江省淡水水产研究所,浙江,湖州,313001;浙江省淡水水产研究所,浙江,湖州,313001
摘    要:以哈维氏弧菌GYC1108-1细菌颗粒性抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,5次免疫后取其脾细胞与SP2/0-Ag-14骨髓瘤细胞融合.用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对杂交瘤进行筛选,阳性克隆经3次亚克隆后,获得一株针对GYC1108-1脂多糖(LPS)的特异性单克隆抗体,命名为2 F 9.该株单抗细胞培养上清ELISA效价为1:1 600,腹水效价为6.4×104,交叉反应结果表明2 F 9除了与测试的多株哈维氏弧菌发生免疫识别外,还与溶藻弧菌、麦氏弧菌和副溶血弧菌代表株发生免疫交叉反应,但不与拟态弧菌、鳗弧菌、嗜水气单胞菌代表株等发生交叉反应.用温和高碘酸氧化法对LPS处理后,GYC1108-1的LPS与2 F 9的反应部分减弱,免疫印迹结果表明2 F 9识别LPS的类脂A抗原.用抑制ELISA法半定量检测GYC1108-1培养上清的LPS,测得培养48 h LPS释放量不超过39μg/mL,大大低于使鱼类致死所需的LPS的剂量.

关 键 词:哈维氏弧菌  脂多糖  间接ELISA  单克隆抗体  免疫印迹  抑制ELISA  交叉反应
修稿时间:2007-08-10
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