| 猪瘟病毒荧光定量PCR标准阳性模板的构建 |
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| 引用本文： | 陆永干,戴贤君,姚建红,黄利权. 猪瘟病毒荧光定量PCR标准阳性模板的构建[J]. 浙江农业学报, 2009, 21(1): 0 |
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| 作者姓名： | 陆永干 戴贤君 姚建红 黄利权 |
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| 作者单位： | 1.浙江大学动物科学学院，浙江杭州310029；2 杭州市畜牧兽医局，浙江杭州310020；3 中国计量学院生命科学学院，浙江杭州310018 |
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| 基金项目： | 杭州市农业发展基金扶持项目 |
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| 摘 要： | 设计扩增猪瘟病毒(swine fever virus，SFV)核酸5’端非翻译区的引物，采用RT-PCR方法克隆目的片段并插入PMD一18 simple T质粒，重组质粒转化大肠杆菌DH5a感受态细胞，提取质粒经PCR和序列测定证实为阳性重组质粒，命名为pSF。将构建的pSF作为标准阳性模板进行荧光定量PCR(FQ-PCR)检测表明，此模板在一20℃保存6个月对结果无显著影响；对于1×10 9，1×10 7，1×10 5拷贝／2μL 的pSF用FQ-PCR方法测定的ct值最大变异系数分别为1．55％；使用该模板建立的定量范围为1×10 2—1×10 11拷贝／2 μL ；构建的阳性重组质粒pSF具有良好的稳定性和特异性。该方法可以用于临床诊断。
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| 关 键 词： | 猪瘟病毒 荧光定量PCR 重组质粒 |
Construction of standard positive template of the fluorescent quantitative PCR assay for detection of swine fever virus |
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| LU Yong-gan,DAI Xian-jun,YAO Jian-hong,HUANG Li-quan. Construction of standard positive template of the fluorescent quantitative PCR assay for detection of swine fever virus[J]. Acta Agriculturae Zhejiangensis, 2009, 21(1): 0 |
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| Authors: | LU Yong-gan DAI Xian-jun YAO Jian-hong HUANG Li-quan |
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| Affiliation: | 1 College ofAnimal Science，Zhejiang University，Hangzhou 310029，China； 2 Hangzhou Bureau of Husbandry and Veterinary，Hangzhou 310020，China； 3 College of Life Science，China Jiliang University，Hangzhou 310018，China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | swine fever virus fluorescent quantitative PCR(FQ-PCR) recombinant plasmid |
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