程序性死亡分子1胞外区的表达及其 抗血清对PCV2增殖的影响

为研究猪的程序性死亡分子1（PD-1）胞外区参与猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2, PCV2）感染的免疫调节功能，PCR扩增健康猪舌组织中PD-1胞外区，构建重组表达质粒pET-28a-PD-1，转化至Rosetta（DE3）。经IPTG 诱导表达后，采用SDS-PAGE和Western Blot 检测重组PD-1胞外段蛋白 exPD-1表达情况。结果显示，重组菌pET-28a-PD1/ DE3，在37 ℃、0.5 mmol·L^-1 IPTG诱导8 h时，exPD-1蛋白的表达量最高，大小约为20 kDa，且以包涵体形式表达。然后将经纯化和复性获得的exPD-1辅以佐剂免疫新西兰兔，制备兔抗exPD-1血清，经Western Blot检测结果显示该抗血清具有较好的反应原性。用PCV2感染猪肾（Porcine kidney-15，PK-15）细胞，采用荧光定量PCR检测PD-1转录水平，结果显示PCV2感染PK-15细胞1 ~ 48 h时PD-1的mRNA转录水平均下调；用兔抗exPD-1血清处理PK-15细胞后感染PCV2，PD-1的转录水平显著上调（P < 0.01），且明显地抑制了PCV2的复制（P < 0.01）。上述结果表明，在体外PCV2感染可引起PD-1转录水平下调，兔抗exPD-1血清可通过封闭PD-1/PD-L1通路，抑制PCV2增殖。