非洲猪瘟病毒、猪圆环病毒2型和猪圆环病毒3型三重PCR检测方法的建立 |
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引用本文: | 俄广晓,孙少辉,邓金,万进,闫才杰,韩峰,马妮妮,戴银娣,杨秋实,张少南,王聪,张振东.非洲猪瘟病毒、猪圆环病毒2型和猪圆环病毒3型三重PCR检测方法的建立[J].中国动物检疫,2023(11):89-94. |
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作者姓名: | 俄广晓 孙少辉 邓金 万进 闫才杰 韩峰 马妮妮 戴银娣 杨秋实 张少南 王聪 张振东 |
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作者单位: | 1. 江苏科技大学生物技术学院;2. 中牧实业股份有限公司;3. 中国农业大学动物医学院农业农村部动物流行病学重点实验室;4. 中牧南京动物药业有限公司 |
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基金项目: | 江苏省基础研究计划(自然科学基金)青年基金项目(BK20201005); |
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摘 要: | 为建立可同时鉴别检测非洲猪瘟病毒(ASFV)以及猪圆环病毒2型(PCV2)、3型(PCV3)的三重PCR方法,根据GenBank中登录的ASFV、PCV2、PCV3相关基因保守序列,分别设计合成特异性引物,通过对引物浓度、退火温度、循环数等反应条件进行优化,建立了针对3种病原的三重PCR检测方法,并开展了敏感性、特异性及重复性试验。结果显示:引物最佳终浓度为0.375 pmol/μL,最佳退火温度为61℃,最佳循环数为35;该方法对ASFV、PCV2、PCV3的扩增目的条带分别为873、530和217 bp,对猪细小病毒和伪狂犬病病毒的扩增结果均为阴性;对ASFV、PCV2、PCV3重组质粒标准品的检出下限均为1×104 copies/μL;相同条件下重复性试验获得均匀一致的结果。结果表明,本研究建立的三重PCR检测方法具有特异性强,敏感性及重复性好等优点,可用于ASFV、PCV2和PCV3感染的快速鉴别诊断及流行病学调查。
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关 键 词: | 非洲猪瘟病毒 猪圆环病毒2型 猪圆环病毒3型 三重PCR |
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