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| 内蒙古白绒山羊Hairless基因实时荧光定量PCR标准质粒和标准曲线的构建 | |
| 引用本文： | 吴萍,张文广,李金泉,李赛明,杨秀娟,徐磊,常子丽,刘兴亮,丽春,刘维,张燕军,王志新,张永斌. 内蒙古白绒山羊Hairless基因实时荧光定量PCR标准质粒和标准曲线的构建[J]. 中国畜牧兽医, 2010, 37(8): 73-78 |
| 作者姓名： | 吴萍 张文广 李金泉 李赛明 杨秀娟 徐磊 常子丽 刘兴亮 丽春 刘维 张燕军 王志新 张永斌 |
| 作者单位： | 1. 内蒙古自治区动物遗传育种与繁殖重点实验室,呼和浩特,010018 2. 内蒙古农业大学动物科学与医学学院,呼和浩特,010018 3. 安徽省农业委员会,合肥,230001 4. 内蒙古白绒山羊种羊场,鄂尔多斯,017000 |
| 基金项目： | 国家绒毛用羊产业技术体系项目，国家"863"计划，内蒙古农业大学博士科研启动基金 |
| 摘 要： | 根据GenBank中绵羊、牛的Hairless和β-actin基因编码区保守序列,设计特异性引物,提取皮肤组织总RNA,经反转录RT-PCR扩增,产物回收纯化后与pGM-T载体连接,转化大肠杆菌感受态细胞Top10,质粒提取后经酶切、PCR和测序鉴定,获得阳性Hairless、β-actin重组质粒;将阳性重组质粒按103～107拷贝/反应梯度稀释作为模板,进行实时荧光定量PCR,系统软件自动生成标准曲线及回归方程。结果显示,产物熔解曲线峰值单一,说明引物特异性高,且无引物二聚体;Hairless和β-actin基因标准曲线相关系数分别为r2=0.998、r2=0.999,说明线性关系好。重复性试验结果显示,所构建的重组质粒9次同条件扩增Ct值具有良好的重现性,且变异率小于6%（107拷贝/反应除外）,说明标准曲线重复性好。试验成功构建了目的基因Hairless、内参基因β-actin的标准质粒和标准曲线,为实时荧光定量PCR检测绒山羊Hairless基因的mRNA表达水平奠定基础。 |
| 关 键 词： | 绒山羊 Hairless基因 Real-time PCR 重组质粒 标准曲线 |
Construction of Standard Plasmid and Standard Curve of Real-time PCR for Inner Mongolia Cashmere Goats Hairless Gene |
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| WU Ping,ZHANG Wen-guang,LI Jin-quan,LI Sai-ming,YANG Xiu-juan,XU Lei,CHANG Zi-li,LIU Xing-liang,LI Chun,LIU Wei,ZHANG Yan-jun,WANG Zhi-xin,ZHANG Yong-bin. Construction of Standard Plasmid and Standard Curve of Real-time PCR for Inner Mongolia Cashmere Goats Hairless Gene[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2010, 37(8): 73-78 | |
| Authors: | WU Ping ZHANG Wen-guang LI Jin-quan LI Sai-ming YANG Xiu-juan XU Lei CHANG Zi-li LIU Xing-liang LI Chun LIU Wei ZHANG Yan-jun WANG Zhi-xin ZHANG Yong-bin |
| Abstract: | |
| Keywords: | Real-time PCR |
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