| 茶树类黄酮O-甲基转移酶基因的克隆及原核表达分析 |
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| 引用本文： | 马成英,吕海鹏,林智,张悦,郭丽,谭俊峰.茶树类黄酮O-甲基转移酶基因的克隆及原核表达分析[J].中国农业科学,2013,46(2):325-333. |
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| 作者姓名： | 马成英 吕海鹏 林智 张悦 郭丽 谭俊峰 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院茶叶研究所/茶叶加工工程研究中心;中国农业科学院研究生院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(30972404);农业部国家现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-23);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2012zl053) |
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| 摘 要： | 【目的】克隆茶树（Camellia sinensis） 的一个类黄酮O-甲基转移酶基因，并对其进行生物信息学分析，构建该基因的原核表达载体，在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白，为进一步研究其酶学特性和调控茶树中甲基化类黄酮物质的代谢机理奠定基础。【方法】采用同源克隆法，以从茶树叶片中提取的总RNA为模板，结合RT-PCR与RACE克隆技术获得该基因cDNA全长，测序正确后将该基因片段连接到原核表达载体pET-28a中，转化大肠杆菌BL21并诱导表达。【结果】该基因cDNA全长为1 246 bp，其开放阅读框为1 077 bp，编码358个氨基酸，推测的蛋白分子量为40.2 kD，理论等电点为5.62；其核苷酸编码序列与葡萄和毛果杨的类黄酮O-甲基转移酶基因相似性分别为80%和81%；经IPTG诱导和SDS-PAGE检测，所构建的原核表达载体表达的融合蛋白与预期蛋白相符合。【结论】利用RT-PCR与RACE克隆技术从茶树叶片中克隆得到了一个类黄酮O-甲基转移酶基因，成功构建了原核表达载体，并使其在大肠杆菌中得到了高效表达。
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| 关 键 词： | 茶树 类黄酮O-甲基转移酶 克隆 原核表达 |
| 收稿时间： | 2012-08-21 |
Cloning and Prokaryotic Expression of Flavonoid O-methyltransferase from Camellia sinensis |
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| MA Cheng-ying,Lü Hai-peng,LIN Zhi,ZHANG Yue,GUO Li,TAN Jun-feng.Cloning and Prokaryotic Expression of Flavonoid O-methyltransferase from Camellia sinensis[J].Scientia Agricultura Sinica,2013,46(2):325-333. |
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| Authors: | MA Cheng-ying Lü Hai-peng LIN Zhi ZHANG Yue GUO Li TAN Jun-feng |
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| Institution: | 1.Tea Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences/Engineering Research Center for Tea Processing, Hangzhou 310008;
2.Graduate School of Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Camellia sinensis flavonoid O-methyhransferase cloning prokaryotic expression |
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