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| 抑制性消减杂交构建奶牛乳房炎抗性相关cDNA文库 | |
| 引用本文： | 曹随忠,李宏滨,王爱华,赵兴绪,杜立新. 抑制性消减杂交构建奶牛乳房炎抗性相关cDNA文库[J]. 畜牧兽医学报, 2005, 36(6): 526-530 |
| 作者姓名： | 曹随忠 李宏滨 王爱华 赵兴绪 杜立新 |
| 作者单位： | 1. 甘肃农业大学动物医学院,兰州,730070;中国农业科学院畜牧研究所,北京,100094 2. 中国农业科学院畜牧研究所,北京,100094 3. 甘肃农业大学动物医学院,兰州,730070 |
| 基金项目： | 奶业重大专项(2002BA518A01 13) |
| 摘 要： | 以经产荷斯坦奶牛外周血白细胞为材料，分离Poly(A)^ RNA，反转录合成单链及双链cDNA，经酶切成平均大小为400～600 bp的片段，将患乳房炎奶牛cDNA分成2组，分别与2种不同的接头连接，再与健康奶牛cDNA进行2次消减杂交和2次抑制性PCR扩增，将第2次PCR产物与pGEM-T载体连接，转化大肠杆菌TOP10感受态细胞进行文库扩增，构建了具有高消减效率的奶牛乳房炎抗性相关cDNA文库。文库扩增后得到610个白色阳性克隆，随机挑选克隆进行PCR鉴定，插入片段主要分布在250～750bp之间。文库的成功构建为进一步筛选、克隆与奶牛乳房炎抗性相关的基因奠定了基础，对研究奶牛乳房炎抗性的分子机制以及乳房炎的综合防制具有重要意义。 |
| 关 键 词： | 奶牛乳房炎 cDNA文库 抑制性消减杂交 抗性 相关 构建 pGEM-T载体 荷斯坦奶牛 PCR扩增 PCR产物 感受态细胞 TOP10 PCR鉴定 接头连接 大肠杆菌 阳性克隆 综合防制 分子机制 白细胞 外周血 RNA 反转录 600 610 片段 酶切 |
| 文章编号： | 0366-6964(2005)06-0526-05 |
Construction of Mastitis Resistant cDNA Library in Dairy Cows Using Suppression Subtractive Hybridization |
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| CAO Sui-zhong,LI Hong-bin,WANG Ai-hua,ZHAO Xing-xu,DU Li-xin. Construction of Mastitis Resistant cDNA Library in Dairy Cows Using Suppression Subtractive Hybridization[J]. Chinese Journal of Animal and Veterinary Sciences, 2005, 36(6): 526-530 | |
| Authors: | CAO Sui-zhong LI Hong-bin WANG Ai-hua ZHAO Xing-xu DU Li-xin |
| Abstract: | |
| Keywords: | dairy cattle mastitis resistance suppression subtractive hybridization library |
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