抗硬蜱亚单位疫苗用候选抗原蛋白的筛选及免疫原性分析

对已经构建保存的PET-28a-GSTK1、PET-28a-GSTE3、PET-28a-Fe1、PET-28a-Fe2和PET-28a-CPL质粒，利用PCR技术检测目的基因，经IPTG诱导后通过SDS-PAGE检测5种重组蛋白(rGSTK1、rGSTE3、rFe1、rFe2和rCPL)的表达，利用His标签蛋白纯化试剂盒纯化4种重组蛋白(rGSTK1、rFe1、rFe2和rCPL),并使用BCA蛋白定量测定试剂盒测定蛋白浓度后，免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，经Western blot测定4种重组蛋白的反应原性，采用间接Elisa测定多克隆抗体效价以及免疫后抗体消长规律。结果显示，5种目的基因条带正确，并未发生丢失；SDS-PAGE检测发现除rGSTE3外，其余4种蛋白(rGSTK1、rFe1、rFe2和rCPL)均能稳定表达且大小分别为28、25、26、27 kDa,以包涵体形式表达；利用His标签纯化蛋白后测定蛋白浓度，结果显示，以250 mmol/L咪唑进行洗脱时可获得高纯度的目的蛋白，蛋白质量浓度分别为2.633、2.532、2.582和2.506 g/L;将纯化后的重组...