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| 稳定表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的CHO-K1细胞系的建立及免疫原性分析 | |
| 引用本文： | 武乐祎,吴素芳,车影,张强,李鹏,卞广林,王选年. 稳定表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的CHO-K1细胞系的建立及免疫原性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 0(5): 1056-1063 |
| 作者姓名： | 武乐祎 吴素芳 车影 张强 李鹏 卞广林 王选年 |
| 作者单位： | 新乡学院生命科学与技术学院生物技术研究中心;郑州大学;浙江海隆生物技术有限公司 |
| 基金项目： | 国家重点研发计划(2016YFD0500702);河南省科技攻关项目(122102110142);河南省高等学校重点科研项目(19A230009) |
| 摘 要： | 建立高表达PCV2-Cap蛋白的CHO-K1悬浮稳转细胞系,鉴定蛋白的免疫原性,为开发新型且有效防治猪圆环病毒的亚单位疫苗奠定基础。构建重组质粒pEE12.4-PCV2-Cap,转染CHO-K1细胞,通过加压筛选,有限稀释,细胞悬浮驯化及Western blot检测得到高表达Cap蛋白的悬浮稳转单克隆细胞株,并对该细胞株进行发酵,纯化得到的目的蛋白,通过小鼠免疫验证其免疫原性。结果表明PCV2-Cap蛋白能够在CHO-K1细胞中正确表达;发酵过程中活细胞密度高达6×10~6个·mL-1,细胞活力在80%以上,PCV2-Cap蛋白表达量约为370 mg·L-1;利用间接ELISA检测小鼠免疫后血清中的抗体水平,证明了利用CHO-K1细胞生产的Cap蛋白具备良好的免疫原性。本研究成功构建了表达PCV2-Cap蛋白的CHO-K1悬浮稳转细胞系,并进一步对目的蛋白进行免疫原性分析,为猪圆环病毒亚单位疫苗的开发打下扎实的基础。 |
| 关 键 词： | CHO-K1 PCV2-Cap 稳转细胞系 免疫原性 |
The Establishment of CHO-K1 Cell Line Stably Expressing High Level PCV2-Cap and Immunogenicity Analysis |
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| WU Leyi,WU Sufang,CHE Ying,ZHANG Qiang,LI Peng,BIAN Guanglin,WANG Xuannian. The Establishment of CHO-K1 Cell Line Stably Expressing High Level PCV2-Cap and Immunogenicity Analysis[J]. Chinese Journal of Animal and Veterinary Sciences, 2019, 0(5): 1056-1063 | |
| Authors: | WU Leyi WU Sufang CHE Ying ZHANG Qiang LI Peng BIAN Guanglin WANG Xuannian |
| Affiliation: | (Biotechnology Research Center,College of Life Science and Technology,Xinxiang University,Xinxiang 453003,China;Zhengzhou University,Zhengzhou 450000,China;Zhejiang Novo-biotech Co.,Ltd.,Shaoxing 312000,China) |
| Abstract: | WU Leyi;WU Sufang;CHE Ying;ZHANG Qiang;LI Peng;BIAN Guanglin;WANG Xuannian(Biotechnology Research Center,College of Life Science and Technology,Xinxiang University,Xinxiang 453003,China;Zhengzhou University,Zhengzhou 450000,China;Zhejiang Novo-biotech Co.,Ltd.,Shaoxing 312000,China) |
| Keywords: | CHO-K1 PCV2-Cap stable cell line immunogenicity |
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