| 表达猪流行性腹泻病毒纤突蛋白的重组水泡性口炎病毒构建和鉴定 |
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| 引用本文： | 柯勇,肖贤,毕波,赵秋华,方心葵,孙涛.表达猪流行性腹泻病毒纤突蛋白的重组水泡性口炎病毒构建和鉴定[J].畜牧与兽医,2019(2):76-82. |
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| 作者姓名： | 柯勇 肖贤 毕波 赵秋华 方心葵 孙涛 |
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| 作者单位： | 上海交通大学农业与生物学院;上海市兽医生物技术重点实验室;上海市种猪场;上海市闵行区动物疫病预防控制中心 |
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| 基金项目： | 上海市闵行区产学研合作计划项目(2016MH250);2015年度科技创新行动计划(15391901600) |
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| 摘 要： | 为表达猪流行性腹泻病病毒(porcine epidemic diarrhea,PEDV)纤突蛋白,利用Mega7基于PEDV纤突蛋白氨基酸序列进行遗传进化分析,选择新发流行毒株纤突蛋白基因,以重组水泡性口炎病毒(rVSVMT)为载体,在rVSVMT基因组G和L间插入目的基因,通过反向遗传学技术拯救VSVMT-S△19重组病毒,Western blot和RT-PCR鉴定重组病毒是否成功表达PEDV纤突蛋白,采用一步生长曲线鉴定VSVMT-S△19在Vero细胞中的生长特性,并与弗氏佐剂混合后肌肉注射小鼠探究其在动物体内的免疫效果。遗传进化分析发现,插入rVSVMT的纤突蛋白基因序列PEDV/CHN/SH-2012-5属于PEDV新发流行毒株GⅡ型; RT-PCR分析重组病毒表达纤突蛋白基因无突变; Western blot鉴定显示出PEDV纤突蛋白和VSV病毒特征条带;一步生长曲线表明重组病毒VSVMT-S△19体外复制滴度可达108TCID50/m L,与VSVMT-GFP无显著性差异(P> 0. 05);小鼠动物试验结果表明,重组病毒成功激发PEDV中和抗体产生,与对照PBS接种组差异显著(P<0. 05)。研究表明,利用重组水泡性口炎病毒(rVSVMT)为载体表达GⅡ型PEDV纤突蛋白能有效激发机体产生高水平中和抗体,为PEDV亚单位疫苗的研制提供了理论和实践依据。
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| 关 键 词： | 水泡性口炎病毒 猪流行性腹泻病 S蛋白 |
Construction and identification of recombinant vesicular stomatitis virus expressing porcine epidemic diarrhea virus S protein |
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| KE Yong,XIAO Xian,BI Bo,ZHAO Qiuhua,FANG Xinkui,SUN Tao.Construction and identification of recombinant vesicular stomatitis virus expressing porcine epidemic diarrhea virus S protein[J].Animal Husbandry & Veterinary Medicine,2019(2):76-82. |
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| Authors: | KE Yong XIAO Xian BI Bo ZHAO Qiuhua FANG Xinkui SUN Tao |
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| Institution: | (School of Agriculture and Biology,Shanghai Jiao Tong University,Shanghai 200240,China;Shanghai City Key Laboratory of Veterinary Science,Shanghai 200240,China;Shanghai Pig Breeding Farm,Shanghai 201408,China;Animal Disease Prevention and Control of Minhang District,Shanghai 201109,China) |
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| Abstract: | KE Yong;XIAO Xian;BI Bo;ZHAO Qiuhua;FANG Xinkui;SUN Tao(School of Agriculture and Biology,Shanghai Jiao Tong University,Shanghai 200240,China;Shanghai City Key Laboratory of Veterinary Science,Shanghai 200240,China;Shanghai Pig Breeding Farm,Shanghai 201408,China;Animal Disease Prevention and Control of Minhang District,Shanghai 201109,China) |
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| Keywords: | vesicular stomatitis virus porcine epidemic diarrhea virus S protein |
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