对虾桃拉综合征病毒环介导逆转录等温扩增快速检测方法的建立

根据对虾桃拉综合征病毒（TSV）结构蛋白基因保守序列，利用Primer Explorer 40软件设计了4条引物，建立桃拉综合征病毒环介导逆转录等温扩增快速（RT LAMP）检测方法，对反应温度和反应时间等参数进行了优化；同时将建立的RT LAMP检测方法与RT PCR进行比较分析，RT LAMP的检测灵敏度比RT PCR高10倍。结果表明，RT LAMP最适反应在60 ℃恒温条件60 min内完成，凝胶电泳呈现梯型条带；反应体系中添加SYBR Green I荧光染料后，绿色的阳性结果明显区别于橙色阴性结果；RT LAMP对感染TSV的对虾检测呈阳性，而对对虾其他常见病原检测均为阴性，具有高的特异性。