新疆野苹果S基因特异性PCR体系优化

目的]构建适合新疆野苹果自交不亲和基因的PCR扩增程序的优化体系.方法]采用单因素比较试验,对影响S-RNase基因PCR反应体系的6个主要因素进行梯度扩增.结果]在20μL的PCR总反应体系中,Mg2+的最适浓度为2.5 mmol/L,dNTP的最适浓度为0.2 mmol/L,引物的最适浓度为0.5mmol/L,TaqDNA聚合酶的最适用量为0.75 U,模板DNA的最适用量为800 ng,最适退火温度为49℃.结论]利用优化的扩增体系在99个新疆野苹果都获得了有效扩增,证明该体系为进行新疆野苹果S基因PCR扩增的最佳体系,具有良好的稳定性.

Optimization on PCR Amplification Procedure of the Malus sieversii S-gene