| 鸡黑素皮质素受体-4反向激动剂细胞筛选模型的建立 |
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| 引用本文： | 周家华,李栋,姜军娜,柴继田,王建兵,李颖颖,王志强.鸡黑素皮质素受体-4反向激动剂细胞筛选模型的建立[J].中国畜牧兽医,2015,42(7):1661-1667. |
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| 作者姓名： | 周家华 李栋 姜军娜 柴继田 王建兵 李颖颖 王志强 |
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| 作者单位： | 1. 扬州大学兽医学院, 扬州 225009;2. 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009 |
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| 基金项目： | 江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD);教育部第46批"留学回国人员科研启动基金" |
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| 摘 要： | 本试验旨在建立体外鸡黑素皮质素受体-4(cMC4R)反向激动剂的细胞筛选模型,为从中草药中筛选出能与cMC4R作用且存在活性的中药成分提供一些基础性的研究。将成功构建的cMC4R真核表达质粒cMC4R-pcDNA3.1(+)-myc与报告基因质粒pGL4.29luc2p/CRE/Hygro]按1:5的比例共转染到CHO-K1细胞,两周后经有限稀释法获得单克隆;将获得的单克隆分别用CRE激活剂Forskolin和MC4R激动剂NDP-MSH作用6 h,挑选萤火虫荧光素酶的相对表达量最高的单克隆作为阳性细胞株;提取阳性细胞总RNA,RT-PCR检测阳性细胞内cMC4R基因、荧光素酶报告基因的转录水平;对MC4R激动剂NDP-MSH的终浓度、NDP-MSH孵育时间及溶剂DMSO的终浓度进行优化,应用Z'因子对筛选方法进行评估。结果显示,获得了5个单克隆(A2、F7、F8、F9、H10),其中单克隆A2的萤火虫荧光素酶的相对表达量最高,将其作为阳性细胞株;RT-PCR在预期位置扩增出大小分别为996和1 653 bp的两条目的条带;激动剂NDP-MSH终浓度为10-9 mol/L、NDP-MSH孵育时间为8 h、溶剂DMSO终浓度小于2%时,筛选模型Z'因子为0.82。结果表明,本试验所建立的筛选方法可靠、稳定,细胞筛选模型可用于cMC4R反向激动剂的筛选,为进一步从中药中筛选出有效物质奠定了基础。
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| 关 键 词： | 鸡黑素皮质素受体-4(cMC4R) 报告基因 细胞筛选模型 |
| 收稿时间： | 2015-01-26 |
Establishment of Cell Screening Model for Discovering Antagonists of Chicken Melanocortin-4 Receptor |
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| ZHOU Jia-hua,LI Dong,JIANG Jun-na,CHAI Ji-tian,WANG Jian-bing,LI Ying-ying,WANG Zhi-qiang.Establishment of Cell Screening Model for Discovering Antagonists of Chicken Melanocortin-4 Receptor[J].China Animal Husbandry & Veterinary Medicine,2015,42(7):1661-1667. |
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| Authors: | ZHOU Jia-hua LI Dong JIANG Jun-na CHAI Ji-tian WANG Jian-bing LI Ying-ying WANG Zhi-qiang |
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| Institution: | 1. College of Veterinary Medicine, Yangzhou University, Yangzhou 225009, China;2. Co-innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infections Disease and Zoonoses, Yangzhou 225009, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | chicken melanocortin-4 receptor (cMC4R) reporter gene cell screening model |
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