欧李ChCCD4基因的克隆与原核表达

类胡萝卜素裂解双加氧酶(CCDs)是类胡萝卜素氧化裂解的重要酶之一,在植物中,CCDs催化裂解产物具有重要的作用。本研究以欧李品种‘农大4号’果实为试验材料,根据转录组测序数据分析,利用RT-PCR从中克隆了到了ChCCD4基因。生物信息分析发现,该序列长度1 794 bp,编码597个氨基酸的蛋白,分子量为65 717.90 Da,等电点为6.10,蛋白质二级结构主要由α-螺旋,β-折叠,随机卷须和延伸链构成,ChCCD4蛋白三级结构与CCD蛋白家族三级结构相似,具有相同的结构域。将ChCCD4基因连接到原核表达载体pet-28a,转化大肠杆菌BL21 (DE3),诱导表达,目的蛋白经过SDS-PAGE凝胶电泳检测,与空白对比,检测出了目的蛋白条带。本研究为ChCCD4基因的功能研究提供理论依据,为欧李育种方向提供了理论参考。