| 发酵床垫料中微生物16S rDNA PCR反应条件的建立与优化 |
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| 引用本文： | 杜东霞,尹红梅,张德元,刘标,许隽,王震,贺月林.发酵床垫料中微生物16S rDNA PCR反应条件的建立与优化[J].农业环境与发展,2014(5). |
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| 作者姓名： | 杜东霞 尹红梅 张德元 刘标 许隽 王震 贺月林 |
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| 作者单位： | 湖南省微生物研究院,湖南 长沙,410009 |
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| 基金项目： | 湖南省农业产业技术体系“湖南省生猪产业技术体系生猪产业规模养殖与环境控制岗位” |
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| 摘 要： | 为探讨发酵床垫料中微生物16S rDNA基因扩增实验中诸多因素对实验结果的影响,采用单因素法对16S rDNA基因扩增时PCR反应体系中的5个潜在因素(Mg2+、dNTP、引物、Taq酶、模板DNA)5水平上进行优化实验,并进一步优化了反应程序中的退火温度、循环次数。结果表明:25μL的最佳反应体系为:10×PCR buffer 2.5μL、MgCl22.0 mmol·L-1、dNTP 0.2 mmol·L-1、引物0.2μmol·L-1、Taq DNA聚合酶0.5 U、模板DNA 50 ng;最佳反应程序为:在94℃下进行4 min预变性;随后循环扩增25个循环(包括94℃变性45 s,53.7℃退火30 s,72℃延伸90 s);最后在72℃下延伸10 min。
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| 关 键 词： | 发酵床垫料 16S rDNA 单因素法 退火温度 |
Establishment and Optimization of Microbial 16S rDNA PCR Reaction Conditions in Fermentation Bed Padding Material |
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| DU Dong-xia,YIN Hong-mei,ZHANG De-yuan,LIU Biao,XU Jun,WANG Zhen,HE Yue-lin.Establishment and Optimization of Microbial 16S rDNA PCR Reaction Conditions in Fermentation Bed Padding Material[J].Agro-Environment and Development,2014(5). |
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| Authors: | DU Dong-xia YIN Hong-mei ZHANG De-yuan LIU Biao XU Jun WANG Zhen HE Yue-lin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | fermentation bed padding material 16S rDNA single factor experiment annealing temperature |
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