三疣梭子蟹免疫相关基因Cystatin的鉴定与表达分析

半胱氨酸蛋白酶抑制剂Cystatin超家族在机体中参与包括免疫调节在内的多种生理病理功能。通过对三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）血细胞全长cDNA文库随机测序，鉴定了一个新颖的I型Cystatin基因，命名为PtCystatin。PtCystatin全长cDNA 960 bp，开放阅读框372 bp，编码123个氨基酸残基，N端19个氨基酸残基为信号肽。PtCystatin成熟肽有104个氨基酸残基，理论分子量为11 64030 Da，等电点pI为524，有一个Cystatin结构域。PtCystatin与I型Cystatin序列同源性高，人Cystatin A与靶酶结合的2个基序在PtCystatin中也保守（M26VPGG30，Q71VVAG75），C端无二硫键。组织表达差异分析显示PtCystatin在胃中表达量高，其次为肝胰脏、鳃、血细胞，肌肉和眼中表达量低。致病菌副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）诱导3 h，血细胞PtCystatin表达量小幅上调121倍（P＜005）；而在6 h和12 h显著下调，分别为047倍（P<001）和057倍（P<005）；24 h恢复到诱导前水平，提示PtCystatin可能参与三疣梭子蟹的免疫防御反应，是一个免疫相关基因。