| 乙型肝炎病毒外膜蛋白真核表达质粒的构建和表达 |
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| 引用本文： | 王 丹,童师雯,张红敏,李 宏,胡 鹏,杨轶轩,张大志,胡怀东.乙型肝炎病毒外膜蛋白真核表达质粒的构建和表达[J].西南农业大学学报,2012,34(6):041-044. |
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| 作者姓名： | 王 丹 童师雯 张红敏 李 宏 胡 鹏 杨轶轩 张大志 胡怀东 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学附属第二医院感染病科 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30972584,30930082,30872250,30771923);国家科技重大专项资助项目(2008ZX10002-006);教育部长江学者和创新团队发展计划资助项目(IRT 0872) |
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| 摘 要： | 目的:构建乙型肝炎病毒(HBV)S基因(包括Pre-S1,Pre-S2和S)的真核表达质粒.方法:将PCR克隆获得的Large surface antigen of HBV,Middle surface antigen of HBV和Small surface antigen of HBV基因片段通过T-A克隆插入真核表达载体Pcmv-Tag2B,构建重组质粒Tag2B-LS,Tag2B-MS和Tag2B-SS,经测序后转染293FT细胞,收取蛋白并鉴定.结果:分别双酶切构建的重组质粒,获得相应大小的DNA片段,且测序证实为有完整读码框的S基因,重组质粒分别转染293FT细胞并表达,经Western Blot鉴定证实.结论:成功构建真核表达质粒Tag2B-LS,Tag2B-MS和Tag2B-SS,并能正确表达,为进一步研究乙型肝炎病毒外膜蛋白的功能打下基础.
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| 关 键 词： | 外膜蛋白 乙型肝炎病毒 Tag2B 真核表达质粒 |
ConstructionofthePlasmidsExpressing
Pcmv-Tag2B-HBsGeneandTheirExpression |
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| WANG Dan,TONG Shi-wen,ZHANG Hong-min,LI Hong, HU Peng,YANG Yi-xuan,ZHANG Da-zhi,HU Huai-dong.ConstructionofthePlasmidsExpressing
Pcmv-Tag2B-HBsGeneandTheirExpression[J].Journal of Southwest Agricultural University,2012,34(6):041-044. |
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| Authors: | WANG Dan TONG Shi-wen ZHANG Hong-min LI Hong HU Peng YANG Yi-xuan ZHANG Da-zhi HU Huai-dong |
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| Institution: | Department of Infectious Diseases,the Second Affiliated Hospital of Chongqing Medical University,Chongqing 400010,China |
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| Abstract: | ToconstructtheeukaryoticexpressionplasmidsoftheSgeneofHBVvirus,weclonedthegene
fragmentslargesurfaceantigenofHBV(LS),middlesurfaceantigenofHBV(MS)andsmallsurfaceantigenofHBV(
SS)throughPCR.TheeukaryoticexpressionplasmidsnamedTag2B-LS,Tag2B-MSand
Tag2B-SSwereconstructedwiththerespectivegenefragmentsandPcmv-Tag2Bvectors.DNAsequencing
identifiedtherecombinantplasmidsconstructedincludingthecompletereadingframeoftheSgene.Then
theplasmidsweretransfectedinto293FTcellsusinglipofecting2000.Westernblotconfirmedthatthe
genefragmentswereexpressedeffectively.Alltheresultsshowedthattheeukaryoticexpressionplasmids
oftheSgeneofHBVviruswereconstructedandexpressedsuccessfullyandthiscouldlayafoundationfor
thefurtherresearchonthefunctionoftheHBV-surfaceproteins. |
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