| 副鸡禽杆菌SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 苗立中,王艳,付强,孟霞,孙翠平,谢金文.副鸡禽杆菌SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立[J].中国兽医学报,2015(1):57-62. |
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| 作者姓名： | 苗立中 王艳 付强 孟霞 孙翠平 谢金文 |
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| 作者单位： | 山东省滨州畜牧兽医研究院;山东绿都生物有限公司 |
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| 摘 要： | 根据GenBank公布的副鸡禽杆菌hagA基因序列设计特异性引物,经PCR扩增出了123bp的片段。产物经回收与pMD18-T Vector连接后转化到基因工程菌DH5α中,提取重组质粒,经PCR及测序鉴定后,作为阳性模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线,并做敏感性试验、特异性试验、重复性试验和临床检测应用。结果显示,标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数R2=0.999 8;溶解曲线特异,产物Tm在81.3~81.5℃之间;最低检测限为0.18拷贝/μL,其敏感性比常规PCR至少高100倍;该方法不与其细菌发生交叉反应,呈现很好的特异性;重复性试验中,批内和批间变异系数均小于1%,说明该方法重复性很好;临床副鸡禽杆菌样本的检测结果表明所建立的荧光定量PCR方法的检测率明显高于常规PCR方法,为该病的早期快速诊断,并定量分析副鸡禽杆菌感染程度奠定了基础。
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| 关 键 词： | 副鸡禽杆菌 SYBR Green I 实时荧光定量PCR 标准曲线 |
Development of real-time fluorescent quantitative PCR assay to detect Avibacterium paragallinarum |
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| MIAO Li-zhong;WANG Yan;FU Qiang;MENG Xia;SUN Cui-ping;XIE Jin-wen.Development of real-time fluorescent quantitative PCR assay to detect Avibacterium paragallinarum[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2015(1):57-62. |
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| Authors: | MIAO Li-zhong;WANG Yan;FU Qiang;MENG Xia;SUN Cui-ping;XIE Jin-wen |
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| Institution: | MIAO Li-zhong;WANG Yan;FU Qiang;MENG Xia;SUN Cui-ping;XIE Jin-wen;Binzhou Animal Science and Veterinary Medicine,of Shandong;Shandong Lvdu Bio-technology Company Limited; |
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