试剂添加次序对胰蛋白酶抑制剂测定结果的影响

引言 胰蛋白酶制剂(TI)的标准测定方法(AACCl983;Kakade等1969,1974)中,将胰蛋白酶溶解于0.001N的HCl,胰蛋白酶抑制剂(大豆粉萃取物)用水稀释,将底物溶解于测定缓冲液中(0.05M HCl,PH 8.2,0.02M CaCl_2)。将酶和抑制剂混合(或用水混合,用不含抑制剂的试管)并加热至37℃。然后将底物溶液也加热至37℃,并加入初始的酶中。保温10min左右,在反应溶液中加入30％的醋酸中止反应,测定波长为410nM时混合物的吸光度。能引起吸光度降低0.01％的萃取物的量被定义为一个胰蛋白酶抑制剂单位(TIU)。