| 小菜蛾ISSR-PCR反应体系的建立与正交设计优化 |
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| 引用本文： | 杨家强,王相晶,郭兆将,朱勋,吴青君,谢文,王少丽,徐宝云,张友军.小菜蛾ISSR-PCR反应体系的建立与正交设计优化[J].植物保护,2012,38(6):90-94. |
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| 作者姓名： | 杨家强 王相晶 郭兆将 朱勋 吴青君 谢文 王少丽 徐宝云 张友军 |
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| 作者单位： | 1. 东北农业大学生命科学学院,哈尔滨,150030
2. 中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京,100081 |
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| 基金项目： | 公益性行业(农业)科研专项，国家科技支撑计划，国家自然科学基金 |
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| 摘 要： | 以小菜蛾(Plutella xylostella)基因组DNA为模板,采用L16(45)正交试验设计方法,建立小菜蛾的ISSR最佳反应体系。通过梯度退火试验,确定不同引物的最适退火温度。优化得到的反应体系(20μL)为:Mg2+浓度1.5mmol/L、Taq DNA聚合酶2.5U、dNTPs浓度0.2mmol/L、引物浓度1.25μmol/L、模板DNA量20ng。反应程序为:94℃预变性5.0min;94℃变性45.0s,40～61℃(不同引物退火温度各异)退火1.0min,72℃延伸1.5min,40个循环;72℃延伸10.0min;10℃保存。利用所建立的ISSR-PCR反应体系,获得了清晰、重复性好的DNA谱带。
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| 关 键 词： | 小菜蛾 ISSR 正交设计 反应体系 |
Establishment and optimization of ISSR-PCR reaction system with orthogonal design for Plutella xylostella |
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| Yang Jiaqiang,Wang Xiangjing,Guo Zhaojiang,Zhu Xun,Wu Qingjun,Xie Wen,Wang Shaoli,Xu Baoyun,Zhang Youjun.Establishment and optimization of ISSR-PCR reaction system with orthogonal design for Plutella xylostella[J].Plant Protection,2012,38(6):90-94. |
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| Authors: | Yang Jiaqiang Wang Xiangjing Guo Zhaojiang Zhu Xun Wu Qingjun Xie Wen Wang Shaoli Xu Baoyun Zhang Youjun |
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| Institution: | 1.College of Life Sciences,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China; 2.Institute of Vegetables and Flowers,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing 100081,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Plutella xylostella ISSR orthogonal design reaction system |
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