| 牛Oct4基因克隆及其逆转录病毒表达载体的构建 |
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| 引用本文： | 陈冬梅,吕长荣,辛晓玲,窦忠英.牛Oct4基因克隆及其逆转录病毒表达载体的构建[J].农业生物技术学报,2010,18(3):526-532. |
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| 作者姓名： | 陈冬梅 吕长荣 辛晓玲 窦忠英 |
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| 作者单位： | 1. 西北农林科技大学动物医学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心,杨凌,712100
2. 西北农林科技大学动物医学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心,杨凌,712100;河南省农业科学院畜牧兽医研究所,郑州,450002 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究与发展计划(863)项目，教育部重大项目 |
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| 摘 要： | 为了克隆奶牛Oct4基因开放性阅读框全序列,并建立高效、稳定产生逆转录病毒质粒pMSCV-Oct4的包装细胞株.我们以50～60日龄的胎牛原始生殖嵴为材料,用RT-PCR的方法扩增出牛Oct4基因全序列,全长为1 083 bp与GenBank公布的序列的同源性为99.4%.将其插入到逆转录病毒载体pMSCVneo的多克隆位点,获得重组逆转录病毒质粒pMSCVneo-Oct4.鉴定正确后,通过Lipofectamine2000将其转导入包装细胞PT67,用含有G418的培养液进行抗性筛选,获得阳性细胞克隆.细胞上清经过RT-PCR、透射电镜及病毒滴度测定等方法鉴定,证实所包装病毒存在,其滴度值为8.83×107 cfu/mL.试验结果表明我们已获得携带牛Oct4基因的高滴度感染性逆转录病毒.
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| 关 键 词： | Oct4基因 克隆 逆转录病毒载体pMSCV 牛 |
Cloning of Bovine Oct4 Gene and Construction of Retroviral Expression Vector |
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| Chen Dongmei,Lv Changrong,Xin Xiaoling,Dou Zhongying.Cloning of Bovine Oct4 Gene and Construction of Retroviral Expression Vector[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2010,18(3):526-532. |
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| Authors: | Chen Dongmei Lv Changrong Xin Xiaoling Dou Zhongying |
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