E3泛素连接酶FBXL8对A亚群禽白血病病毒复制的影响 |
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引用本文: | 郑诗龄,陈雪阳,刘晶,方春,梁雄燕,杨玉莹.E3泛素连接酶FBXL8对A亚群禽白血病病毒复制的影响[J].中国畜牧兽医,2024(4):1696-1705. |
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作者姓名: | 郑诗龄 陈雪阳 刘晶 方春 梁雄燕 杨玉莹 |
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作者单位: | 长江大学动物科学技术学院 |
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基金项目: | 国家自然科学基金面上项目(31972646); |
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摘 要: | 【目的】制备鸡E3泛素连接酶FBXL8多克隆抗体,探究鸡源FBXL8对A亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)在鸡胚成纤维细胞(DF-1)内复制的影响。【方法】以DF-1细胞cDNA为模板,通过PCR扩增FBXL8基因,构建鸡源FBXL8原核表达重组质粒pET-28a-FBXL8,将其转化大肠杆菌表达菌株RIL进行诱导表达及纯化,将表达产物His-FBXL8免疫10月龄新西兰大白兔制备多克隆抗体,利用Western blotting和间接ELISA分别检测抗体特异性及效价;针对已公布的FBXL8基因序列设计过表达引物及靶向FBXL8基因的干扰序列,构建过表达质粒psi-flag-FBXL8及干扰质粒pLKO.1-FBXL8-shRNA,使用Western blotting检测其表达效果。将构建成功的过表达质粒和干扰质粒转染DF-1细胞,24 h后感染ALV-A,通过半定量PCR、Western blotting分别检测ALV-A的结构蛋白P27、GP85表达水平。【结果】PCR成功扩增出大小为1 182 bp的FBXL8基因片段,...
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关 键 词: | FBXL8 A亚群禽白血病病毒(ALV-A) 多克隆抗体 病毒复制 |
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