| 绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 王永飞,邓博文,刘晓艳,哈尔勒哈·阿曼太,郭嘉栋,周正国,蔡江,李有文.绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白的原核表达及多克隆抗体制备[J].中国畜牧兽医,2024(2):689-699. |
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| 作者姓名： | 王永飞 邓博文 刘晓艳 哈尔勒哈·阿曼太 郭嘉栋 周正国 蔡江 李有文 |
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| 作者单位： | 1. 塔里木大学动物科学与技术学院,新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技兵团重点实验室;2. 新疆生产建设兵团南疆动物疫病诊断与防控工程实验室;3. 阿克苏职业技术学院 |
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| 摘 要： | 【目的】克隆绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)EF-Tu基因，原核表达获得EF-Tu蛋白，制备抗EF-Tu蛋白的兔源多克隆抗体，为研究肺炎支原体EF-Tu蛋白的结构和功能奠定基础。【方法】采用重叠延伸PCR方法将pET-28a-EF-Tu质粒中EF-Tu基因中间的TGA密码子突变为TGG,并对测序结果与其他支原体参考株进行相似性比对和遗传进化分析，利用在线软件对其推测的蛋白序列进行生物信息学分析。将突变后的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行原核表达，经SDS-PAGE和Western blotting鉴定，利用镍柱亲和层析法纯化，以纯化的EF-Tu融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体，采用间接ELISA和Western blotting检测多克隆抗体效价及免疫反应性。【结果】试验成功突变了EF-Tu基因中TGA位点，并构建了融合表达His标签pET-28a-EF-Tu′原核表达载体。生物信息学分析表明，克隆的EF-Tu基因与绵羊肺炎支原体MoGH3-3菌株相似性最高，亲缘关系最近；编码387个氨基酸，无N-糖基化位点和跨膜区域，存在10...
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| 关 键 词： | 绵羊肺炎支原体 重叠延伸PCR EF-Tu基因 多克隆抗体 |
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