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| 产单核细胞李斯特菌溶血素基因的克隆及原核表达 | |
| 引用本文： | 张衍海,白艳艳,张彦明,郑增忍,张宝,童光志. 产单核细胞李斯特菌溶血素基因的克隆及原核表达[J]. 中国预防兽医学报, 2008, 30(11) |
| 作者姓名： | 张衍海 白艳艳 张彦明 郑增忍 张宝 童光志 |
| 作者单位： | 1. 中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,黑龙江,哈尔滨,150001;中国动物卫生与流行病学中心,山东,青岛,266032 2. 西北农林科技大学,动物医学学院,陕西,杨陵,712100 3. 中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,黑龙江,哈尔滨,150001 4. 中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,黑龙江,哈尔滨,150001;中国农业科学院,上海兽医研究所,上海,200232 |
| 摘 要： | 利用PCR方法扩增产单核细胞李斯特菌（LM）的溶血素基因hlyA，获得一条大小约为1600bp的目的片段，将其与pMD18-T载体连接，经酶切、PCR鉴定，命名为pMD18-T—hlyA。测序结果显示所扩增的hlyA基因与GenBank中发表的hlyA的序列同源性为99％。利用含有BamHⅠ／XhoⅠ酶切位点引物B从pMD18-T—hlyA扩增不含信号肽序列的目的片段B，获得了大小约为1500bp的基因片段，该片段与pET32a表达载体经BamHⅠ／XhoⅠ处理后进行连接，转化BL21受菌体。通过酶切、PCR鉴定及序列测定后获得阳性pET32a-hlyA表达重组质粒，将重组菌用终浓度为0．1mmol／L的IPTG进行诱导表达，结果表明重组菌在诱导2h～3h表达量最高，融合蛋白约占菌体的40％，分子量大小约为80ku；利用LM的阳性血清进行Western blot分析，证实该融合蛋白可以被LM阳性血清所识别，为今后研制针对该蛋白的单克隆抗体和建立间接ELISA诊断方法提供了条件。 |
| 关 键 词： | 产单核细胞李斯特菌 溶血素 克隆 表达 |
Cloning and expression of listeriolysin O gene of Listeria monocytogenes |
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| ZHANG Yan-hai,BAI Yan-yan,ZHANG Yan-ming,ZHENG Zeng-ren,ZHANG Bao,TONG Guang-zhi. Cloning and expression of listeriolysin O gene of Listeria monocytogenes[J]. Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine, 2008, 30(11) | |
| Authors: | ZHANG Yan-hai BAI Yan-yan ZHANG Yan-ming ZHENG Zeng-ren ZHANG Bao TONG Guang-zhi |
| Abstract: | |
| Keywords: | hlyA |
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